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ysw109

铁虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取求助

植物总RNA提取后,电泳检测,求鉴别正常吗,,能不能做实时定量PCR,,重谢RNA提取求助
dianyong.png
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

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这貌似还不是一般的降解。连模糊的28s,18s两条带都看不出来,5s附近模糊一片,应该是RNA提的不好,降解严重了,估计得重新提取了。。。不过也有可能是跑电泳没跑好,,我RNA上样量3ul,180V,15min,基本没啥问题
6楼2013-09-06 22:11:25
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wwjcas570

木虫 (著名写手)

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这个肯定不行啊,你重新提取吧,需要注意很多问题,主要如下:
1. 最好用鲜样,或者取材后马上用液氮速冻的材料,放入-70保存的材料。
2. 研磨时在液氮中。
3. 研磨过程中不能融化,研磨成粉后立即加入Trizol试剂。
4. 所有的水都用DEPC水。
5. 电泳时间短一点。
详细情况你可以参考这几个帖子:
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
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7楼2013-09-07 09:45:48
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fanwq258

木虫 (正式写手)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-07 13:35:27
RNA降解严重,不知道是提取过程中降解的,还是电泳过程中降解的,还有基因组污染,用DNAase除一下
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
8楼2013-09-07 13:30:24
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普通回帖

237732934

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-07 13:34:14
RNA不可以电泳检测吧 不会降解吗
2楼2013-09-06 10:31:23
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longrna

新虫 (正式写手)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:34:44
这个电泳不行。
不知是电泳本身的问题还是你提的降解了。
伟大航线....
3楼2013-09-06 11:58:34
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

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反转录,然后拿cDNA做个内参PCR试一下
偶时晴天偶时雨
4楼2013-09-06 14:51:54
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yanshuai511

铜虫 (小有名气)

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应该是不可以,降解的挺厉害的。做电泳的东西一定是RNAase free的哦。
5楼2013-09-06 22:02:44
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desheng101

木虫 (正式写手)

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降解比较严重,建议楼主多看看RNA提取注意事项
9楼2013-09-07 15:24:47
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

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你的这个条带不行 不清晰 都糊了 重新做下吧 多做几遍就好了
船到桥头自然直
10楼2013-09-07 17:13:59
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