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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取求助
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ysw109

铁虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取求助

植物总RNA提取后，电泳检测，求鉴别正常吗，，能不能做实时定量PCR，，重谢RNA提取求助
dianyong.png
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生命不息，研究不止
1楼 2013-09-05 22:03:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

随波逐刘

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:35:10
这貌似还不是一般的降解。连模糊的28s，18s两条带都看不出来，5s附近模糊一片，应该是RNA提的不好，降解严重了，估计得重新提取了。。。不过也有可能是跑电泳没跑好，，我RNA上样量3ul，180V，15min，基本没啥问题
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6楼2013-09-06 22:11:25
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wwjcas570

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:35:18
这个肯定不行啊，你重新提取吧，需要注意很多问题，主要如下：
1. 最好用鲜样，或者取材后马上用液氮速冻的材料，放入-70保存的材料。
2. 研磨时在液氮中。
3. 研磨过程中不能融化，研磨成粉后立即加入Trizol试剂。
4. 所有的水都用DEPC水。
5. 电泳时间短一点。
详细情况你可以参考这几个帖子：
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
http://qijibio.com/forum.php?mod ... ;amp;extra=page%3D1
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7楼2013-09-07 09:45:48
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fanwq258

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-07 13:35:27
RNA降解严重，不知道是提取过程中降解的，还是电泳过程中降解的，还有基因组污染，用DNAase除一下
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
8楼2013-09-07 13:30:24
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普通回帖

237732934

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-07 13:34:14
RNA不可以电泳检测吧 不会降解吗
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2楼2013-09-06 10:31:23
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:34:44
这个电泳不行。
不知是电泳本身的问题还是你提的降解了。
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伟大航线....
3楼2013-09-06 11:58:34
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:34:54
反转录，然后拿cDNA做个内参PCR试一下
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偶时晴天偶时雨
4楼2013-09-06 14:51:54
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yanshuai511

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-07 13:35:02
应该是不可以，降解的挺厉害的。做电泳的东西一定是RNAase free的哦。
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5楼2013-09-06 22:02:44
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desheng101

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降解比较严重，建议楼主多看看RNA提取注意事项
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9楼2013-09-07 15:24:47
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的这个条带不行 不清晰 都糊了 重新做下吧 多做几遍就好了
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船到桥头自然直
10楼2013-09-07 17:13:59
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