应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a
221/3返回列表123下一页
查看: 2901  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

[求助] Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a

Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a，转化挑单菌落进行菌液PCR有目的条带，提质粒以质粒为模板PCR没有条带，质粒跑胶好像是空的，但是没有连接上表达载体的目的基因怎么可以扩展的……（因为每次对提质粒用的菌液进行PCR都有目的条带，阴性对照也有很浅的条带，很浅，应该不影响吧），求解释，因为下面急着做突变~~~感谢各位大神！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-04 16:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ivan94

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-06 17:36:39
看了你的描述，除了他们说的，我觉得还有一种可能是长得单菌落根本不是大肠杆菌，可能是杂菌，你挑了杂菌摇后PCR有杂带，提质粒更是提不出来。也就是说很可能你连接失败了。ps：你的单菌落从涂板到长出来用了多长时间？
赞一下(1人) 回复此楼
生如夏花，在追求绚烂的结果的同时，别忘了享受过程的美好！
14楼2013-09-06 17:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:02:12
你质粒提的有没有问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-05 00:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:01:30
阴性对照的条带与目的条带大小相同吗？如果是，说明PCR体系污染了，问题不是已经很大了吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-05 01:46:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:01:53
这种情况下，污染的可能性很大
赞一下 回复此楼
自主创业者，捣腾生物试剂
4楼2013-09-05 10:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdmchql

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。从根本去入手 2013-09-05 15:01:39
这显然是假阳性结果，最好更换了PCR试剂，还有水经常是最可能的污染源
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-05 11:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 忽而今秋 at 2013-09-05 00:28:42
你质粒提的有没有问题？

本来用的生工的，后来用OMEGA又提了一次
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-05 13:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-05 01:46:53
阴性对照的条带与目的条带大小相同吗？如果是，说明PCR体系污染了，问题不是已经很大了吗？

大小一样大，PCR体系污染，现在只有可能是引物污染了，水是新的，Master MIX也是新的
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-05 13:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-05 10:56:50
这种情况下，污染的可能性很大

恩恩
回复此楼
8楼2013-09-05 13:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JAYWEN书生

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gdmchql at 2013-09-05 11:26:01
这显然是假阳性结果，最好更换了PCR试剂，还有水经常是最可能的污染源

都有换，可能是引物被污染了
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-05 13:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上文慧

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
JAYWEN书生(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-06 11:48:25
一种可能是你pcr试剂被污染了，
另一种就是你提rna，没有提出来，你是用的试剂盒吗？
赞一下 回复此楼
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
10楼2013-09-05 15:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 JAYWEN书生 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭