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JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

[求助] Nde1和BamH1做双酶切,T载上测过序,现在要从T载上切下,连到表达载体PET-23a

Nde1和BamH1做双酶切,T载上测过序,现在要从T载上切下,连到表达载体PET-23a,转化挑单菌落进行菌液PCR有目的条带,提质粒以质粒为模板PCR没有条带,质粒跑胶好像是空的,但是没有连接上表达载体的目的基因怎么可以扩展的……(因为每次对提质粒用的菌液进行PCR都有目的条带,阴性对照也有很浅的条带,很浅,应该不影响吧),求解释,因为下面急着做突变~~~感谢各位大神!!
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JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gdmchql at 2013-09-05 11:26:01
这显然是假阳性结果,最好更换了PCR试剂,还有水经常是最可能的污染源

都有换,可能是引物被污染了
9楼2013-09-05 13:36:55
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忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:02:12
你质粒提的有没有问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-09-05 00:28:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:01:30
阴性对照的条带与目的条带大小相同吗?如果是,说明PCR体系污染了,问题不是已经很大了吗?
3楼2013-09-05 01:46:53
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:01:53
这种情况下,污染的可能性很大
自主创业者,捣腾生物试剂
4楼2013-09-05 10:56:50
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