10楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-09-05 15:05:51
一种可能是你pcr试剂被污染了，
另一种就是你提rna，没有提出来，你是用的试剂盒吗？

11楼: Originally posted by JAYWEN书生 at 2013-09-05 18:14:40
是试剂盒，不是RNA，提的质粒。今天下午换了水，没有P出条带，连接在T载体上的目的基因能P出条带，就是酶切连接到表达载体上时就没条带了...

12楼: Originally posted by Jaaar at 2013-09-06 11:09:48
根据你之前的描述应该是存在PCR体系污染，最有可能的应该是在引物。

那么假设引物的污染不影响结果，那么还是有以下的问题需要解决的

酶切之后有跑胶确认pET载体以及带目的基因的T载体都完全反应了么？

...

14楼: Originally posted by ivan94 at 2013-09-06 17:21:16
看了你的描述，除了他们说的，我觉得还有一种可能是长得单菌落根本不是大肠杆菌，可能是杂菌，你挑了杂菌摇后PCR有杂带，提质粒更是提不出来。也就是说很可能你连接失败了。ps：你的单菌落从涂板到长出来用了多长时 ...

16楼: Originally posted by JAYWEN书生 at 2013-09-06 19:28:21
涂板后过夜就能长出来，菌液PCR后只有一条跟目的基因大小一样的带，就是在提质粒后PCR没有目的条带，有杂带。。然后再对质粒进行双酶切，没有目的基因…………...

18楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-09-07 11:01:49
你菌液pcr用的是目的片段的引物么？还是载体的？

17楼: Originally posted by ivan94 at 2013-09-06 20:19:16
那就很可能你挑的是杂菌的点，刚好跟你目的基因大小差不多，不能说大小一样，因为2个marker条带之间也看不出精确的大小。从头重新连吧！...