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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a
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JAYWEN书生

银虫 (小有名气)

[求助] Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a

Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a，转化挑单菌落进行菌液PCR有目的条带，提质粒以质粒为模板PCR没有条带，质粒跑胶好像是空的，但是没有连接上表达载体的目的基因怎么可以扩展的……（因为每次对提质粒用的菌液进行PCR都有目的条带，阴性对照也有很浅的条带，很浅，应该不影响吧），求解释，因为下面急着做突变~~~感谢各位大神！！
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1楼 2013-09-04 16:47:05
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ivan94

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

再ps：根据实验经验，菌液PCR不靠谱，有的实际连上了也p不出来，没连上的也可能出现所谓的“目的”条带，所以连接后一定要酶切和测序，提质粒也不难，我还是觉得你挑的单菌落是杂菌的可能性大
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生如夏花，在追求绚烂的结果的同时，别忘了享受过程的美好！
15楼2013-09-06 17:26:45
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忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:02:12
你质粒提的有没有问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2013-09-05 00:28:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-05 15:01:30
阴性对照的条带与目的条带大小相同吗？如果是，说明PCR体系污染了，问题不是已经很大了吗？
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3楼2013-09-05 01:46:53
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-05 15:01:53
这种情况下，污染的可能性很大
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自主创业者，捣腾生物试剂
4楼2013-09-05 10:56:50
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