应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酿酒酵母转化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1223  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 酿酒酵母转化 已有2人参与

大家做酵母转化时都是这样做的吗？
制备感受态：挑取2-3mm大小单克隆到3ml YPDA 30° 250rpm 震荡培养8-12h------->按1：10000比例转接到50 ml YPDA 培养16-20h OD600=0.15-0.3-------->2500rpm 5min 常温 离心， 用30 ml 无菌水洗一次----------->加入100 ml YPDA 震荡培养3-5小时，OD600=0.4-0.5 -------->将其中50ml 离心，用1.1*LiAC/TE 1.5 ml 重悬，高速离心，去上清，用600 ul 重悬成酵母感受态
转化：担体DNA煮5min 冰水浴 重复一次------>混合5 ul 担体DNA 1ul 质粒 加入500 um PEG/LIAC--------->30° 200rpm 半个小时------>加入20 ul DMSO---------->42° 热休克 期间每隔5分钟混匀一次------->加 YPDA plus 1ml 高速离心，去上清-------->1 ml 0.9% NACL重悬 完毕
    1. 为什么我的菌株在第二次扩培时摇了12个小时OD就达到1.3以上了？然后我就按照那个比例接的菌，例如：本应该OD0.3接到100ml的，也就是一共OD30，所以我的菌如果是OD1.5的话，就接入20ml到100ML的培养基里面。然后就只摇了半个小时就到了OD0.4多了，然后就硬着头皮做了。。。
   2.另外，质粒就只添加1微升吗？还是担体DNA和质粒的比例是5:1就好？
3.30度处理的时候是要摇床吗？我看有的是水浴的，每10-15Min混匀一下，怎样处理比较好呢？
4.大家都用了YPDA吗？就用普通的YPD不行吗？会有什么不一样的结果呢？
5.涂板后都要等上3天菌落直径到2-3mm吗？我的长了一天半就有1mm多了，也可以挑到了，是不是还要再长长呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-31 10:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
。。。。。木有人回复了么
回复此楼
4楼2013-09-02 16:56:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

xikexiao

禁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-31 19:00:09
本帖内容被屏蔽
2楼2013-08-31 16:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xikexiao at 2013-08-31 16:00:13
1.OD的话1.0-1.3之间是合适的
2.质粒的话1-2u足够
3.最好用摇床
4.普通的YPD即可
5.菌落的话可以挑到即可，一般培养48H

你好，非常感谢你的回答。
1.可是步骤上为什么说OD是0.15-0.3呢?
2.质粒的话，不用管浓度吗?
3.还有感受态可不可以-80度冻起来，继续用啊？每次做那么多就用一点点，有点浪费，做起来也挺麻烦的。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-31 16:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yan.007133

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-08-31 16:42:49
你好，非常感谢你的回答。
1.可是步骤上为什么说OD是0.15-0.3呢?
2.质粒的话，不用管浓度吗?
3.还有感受态可不可以-80度冻起来，继续用啊？每次做那么多就用一点点，有点浪费，做起来也挺麻烦的。。。...

1.步骤的话建议参考冷泉港实验室推荐的步骤
3.最好不要冻，现用现做
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-02 19:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂（080500） +7 A child 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:46 by 唐沐儿
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +14 Mr. Z 2026-03-25 14/700 2026-03-29 17:27 by 学员8dgXkO
[考研] 277跪求调剂 +6 1915668 2026-03-27 10/500 2026-03-29 16:03 by 王亮_大连医科大
[考研] 332求调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭