应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酿酒酵母转化
51/1返回列表
查看: 1330  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 酿酒酵母转化 已有2人参与

大家做酵母转化时都是这样做的吗？
制备感受态：挑取2-3mm大小单克隆到3ml YPDA 30° 250rpm 震荡培养8-12h------->按1：10000比例转接到50 ml YPDA 培养16-20h OD600=0.15-0.3-------->2500rpm 5min 常温 离心， 用30 ml 无菌水洗一次----------->加入100 ml YPDA 震荡培养3-5小时，OD600=0.4-0.5 -------->将其中50ml 离心，用1.1*LiAC/TE 1.5 ml 重悬，高速离心，去上清，用600 ul 重悬成酵母感受态
转化：担体DNA煮5min 冰水浴 重复一次------>混合5 ul 担体DNA 1ul 质粒 加入500 um PEG/LIAC--------->30° 200rpm 半个小时------>加入20 ul DMSO---------->42° 热休克 期间每隔5分钟混匀一次------->加 YPDA plus 1ml 高速离心，去上清-------->1 ml 0.9% NACL重悬 完毕
    1. 为什么我的菌株在第二次扩培时摇了12个小时OD就达到1.3以上了？然后我就按照那个比例接的菌，例如：本应该OD0.3接到100ml的，也就是一共OD30，所以我的菌如果是OD1.5的话，就接入20ml到100ML的培养基里面。然后就只摇了半个小时就到了OD0.4多了，然后就硬着头皮做了。。。
   2.另外，质粒就只添加1微升吗？还是担体DNA和质粒的比例是5:1就好？
3.30度处理的时候是要摇床吗？我看有的是水浴的，每10-15Min混匀一下，怎样处理比较好呢？
4.大家都用了YPDA吗？就用普通的YPD不行吗？会有什么不一样的结果呢？
5.涂板后都要等上3天菌落直径到2-3mm吗？我的长了一天半就有1mm多了，也可以挑到了，是不是还要再长长呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-31 10:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xikexiao

禁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-31 19:00:09
本帖内容被屏蔽
2楼2013-08-31 16:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xikexiao at 2013-08-31 16:00:13
1.OD的话1.0-1.3之间是合适的
2.质粒的话1-2u足够
3.最好用摇床
4.普通的YPD即可
5.菌落的话可以挑到即可，一般培养48H

你好，非常感谢你的回答。
1.可是步骤上为什么说OD是0.15-0.3呢?
2.质粒的话，不用管浓度吗?
3.还有感受态可不可以-80度冻起来，继续用啊？每次做那么多就用一点点，有点浪费，做起来也挺麻烦的。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-31 16:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
。。。。。木有人回复了么
回复此楼
4楼2013-09-02 16:56:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yan.007133

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-08-31 16:42:49
你好，非常感谢你的回答。
1.可是步骤上为什么说OD是0.15-0.3呢?
2.质粒的话，不用管浓度吗?
3.还有感受态可不可以-80度冻起来，继续用啊？每次做那么多就用一点点，有点浪费，做起来也挺麻烦的。。。...

1.步骤的话建议参考冷泉港实验室推荐的步骤
3.最好不要冻，现用现做
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-02 19:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 piaoyunokok 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:46 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +9 锦衣卫寒战 2026-07-28 13/650 2026-08-04 07:21 by Ermito
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭