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花千树豆一颗

新虫 (初入文坛)

[求助] DGGE新手求助

小木虫新手，DGGE新手求助！
样品：16S rRNA基因V3片段扩增 分别为两个不同的样品
胶：8%胶，梯度浓度27%-52%
跑胶：150V，4小时
染色：EB染色
第一次做DGGE，结果如下，急求助两个问题，望高手赐教！
1 条带不是很明显，不sharp，为什么呢？如果是因为EB敏感性不够高的话，用SYBR，Gelstain，还是银染哪个方法更好呢？
2 paper上报到最好的方法是电压*时间=1000，但是我如果跑更久时间的话，似乎会跑出胶去。这两张图片跑胶的程度为蓝色的溴酚蓝刚刚跑出胶。达不到那个公式，这是什么原因造成的呢？
多谢高手指点，不甚感激啊！~
DGGE新手求助
1.jpg


DGGE新手求助-1
2.png
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花千树豆一颗

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1楼 2013-08-27 17:26:49
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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 花千树豆一颗 at 2013-08-28 15:22:09
多多感谢啊，因为第一次做，只用了两个sample，这个就是全图了。今天再做一次

你把下游的浓度挑低
赞一下(1人) 回复此楼
挥霍不起青春
4楼2013-08-28 20:20:34
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查看全部 4 个回答

开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你最好把全图发上来，我好给你分析分析。只能简单的看出 可能你的胶的浓度太大，结果带就分不开；如果还是太亮太密的话，把点样量降低，点25微升试试
赞一下(1人) 回复此楼
挥霍不起青春
2楼2013-08-28 11:42:09
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花千树豆一颗

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
多多感谢啊，因为第一次做，只用了两个sample，这个就是全图了。今天再做一次

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-08-28 15:22:09
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