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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电击转化各种不长，求助啊~~~
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gg880712

新虫 (初入文坛)

[求助] 电击转化各种不长，求助啊~~~

做一种革兰氏阴性细菌的电击转化，采用了2.2KV电压，电击时间在5ms左右，加NA培养基复苏三小时后涂相应抗性平板各种不长啊。。。
   实验室有一株和我做的菌同属的细菌，用相同的转化方法已经很成熟了，效率很高，我这个是怎么回事啊。。。急啊，折腾了两个月了。。。

[ Last edited by gg880712 on 2013-8-6 at 10:10 ]
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1楼 2013-08-06 10:08:50
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-23 17:10:55
不知你具体怎么做的，但感觉阴性菌电转时电压不用那么高吧，建议用1.5KV试试
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2楼2013-08-06 10:21:46
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gg880712

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-08-06 10:21:46
不知你具体怎么做的，但感觉阴性菌电转时电压不用那么高吧，建议用1.5KV试试

嗯 可以尝试一下 但是我从1.8--2.5kv都试了 木有长。。。还有个问题，我电转的那个重组载体上有SacB基因，所以电转后复苏和涂板的NA里都没有加蔗糖，不加蔗糖会不会对细菌生长有影响？
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3楼2013-08-06 10:47:35
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-23 18:00:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by gg880712 at 2013-08-06 10:47:35
嗯 可以尝试一下 但是我从1.8--2.5kv都试了 木有长。。。还有个问题，我电转的那个重组载体上有SacB基因，所以电转后复苏和涂板的NA里都没有加蔗糖，不加蔗糖会不会对细菌生长有影响？...

不了解SacB基因作用机理，建议LZ自己查找相关文献，
“sacB 基因编码分泌型蔗糖果聚糖酶( levansucrase) , 该酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖,并且将果糖聚合成高分子量的果聚糖。但高分子量果聚糖积累对细胞存在潜在的毒性作用, 可造成细胞死亡。尽管枯草芽孢杆菌sacB 基因导致许多革兰氏阴性菌( 如E. coli , Erwinia chrysanthemi, Legionella pneumophila) 和革兰氏阳性菌( 如Corynebacteriu glutamicum ) 死亡的原理尚不清楚, 但将sacB 基因赋予细胞的蔗糖敏感特性作为一种阴性筛选克隆的标记, 在生物研究中特别是在基因克隆等遗传操作中有着广泛的应用。”
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4楼2013-08-06 12:10:05
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加菲的树袋熊

禁虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-23 17:11:11
本帖内容被屏蔽
5楼2013-08-23 16:26:13
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gg880712

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 加菲的树袋熊 at 2013-08-23 16:26:13
培养基不加蔗糖的话 就要补充相应的碳源 我也做过SacB载体的电转 转化之后涂板用的培养基并不是平时用的培养基去掉蔗糖这么简单

有特定的培养基么？我这个菌在LB上不好好长，所以换了NA，NA除了蔗糖以外，牛肉膏蛋白胨里都有碳源，而且野生型菌可以长得。
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6楼2013-08-29 15:10:04
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welyzjj198

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 加菲的树袋熊 at 2013-08-23 16:26:13
培养基不加蔗糖的话 就要补充相应的碳源 我也做过SacB载体的电转 转化之后涂板用的培养基并不是平时用的培养基去掉蔗糖这么简单

您好   我现在也做SacB载体的电转，转到粪肠球菌里  做了几次，电转后不长菌，请问您用的复苏培养基是什么？涂板的培养基是什么？急 ！！！！！！！！
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7楼2015-05-10 09:31:41
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