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gg880712新虫 (初入文坛)
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[求助]
电击转化各种不长，求助啊~~~
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做一种革兰氏阴性细菌的电击转化，采用了2.2KV电压，电击时间在5ms左右，加NA培养基复苏三小时后涂相应抗性平板各种不长啊。。。 实验室有一株和我做的菌同属的细菌，用相同的转化方法已经很成熟了，效率很高，我这个是怎么回事啊。。。急啊，折腾了两个月了。。。 [ Last edited by gg880712 on 2013-8-6 at 10:10 ] |
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gg880712
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gg880712
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3楼2013-08-06 10:47:35
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-23 18:00:08
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不了解SacB基因作用机理，建议LZ自己查找相关文献， “sacB 基因编码分泌型蔗糖果聚糖酶( levansucrase) , 该酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖,并且将果糖聚合成高分子量的果聚糖。但高分子量果聚糖积累对细胞存在潜在的毒性作用, 可造成细胞死亡。尽管枯草芽孢杆菌sacB 基因导致许多革兰氏阴性菌( 如E. coli , Erwinia chrysanthemi, Legionella pneumophila) 和革兰氏阳性菌( 如Corynebacteriu glutamicum ) 死亡的原理尚不清楚, 但将sacB 基因赋予细胞的蔗糖敏感特性作为一种阴性筛选克隆的标记, 在生物研究中特别是在基因克隆等遗传操作中有着广泛的应用。” |
4楼2013-08-06 12:10:05
