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jue9958

新虫 (小有名气)

[求助] 引物退火温度

内参引物为58度，特异性引物为60度，实在是不能做温度梯度，求告知该如何选择温度？
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1楼 2013-08-04 10:04:45
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duoyidian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看哪个引物做pcr反应的速度慢，这个很多书上都有啊
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2楼2013-08-04 10:54:59
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jue9958(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 15:42:18
这个退火温度要求没那么严格，试一下不就知道了
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jiayoubashaonian
3楼2013-08-04 15:20:48
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宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 15:42:29
同样的样本、试剂，只要把仪器的退火温度改一下，多试几个温度，不就知道哪个温度最适合了吗？
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让自己变得更强
4楼2013-08-04 15:41:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-06 09:43:21
看你要做什么实验了。如果只是需要同时P出两个片段，直接用退火温度低的那个温度。如果是要做定量，需要优化到两个反应的扩增效率和特异性最好的温度。
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5楼2013-08-05 00:42:28
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jue9958

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-05 00:42:28
看你要做什么实验了。如果只是需要同时P出两个片段，直接用退火温度低的那个温度。如果是要做定量，需要优化到两个反应的扩增效率和特异性最好的温度。

需要做定量的，求详细指教。
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6楼2013-08-05 08:03:04
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jue9958

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duoyidian at 2013-08-04 10:54:59
看哪个引物做pcr反应的速度慢，这个很多书上都有啊

呃。求相关书籍。
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7楼2013-08-05 08:04:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-06 09:43:31
引用回帖:
6楼: Originally posted by jue9958 at 2013-08-05 08:03:04
需要做定量的，求详细指教。...

如果是定量，最好做温度梯度检查引物的特异性和大致的扩增效率。当然，退火温度在设计引物时就要考虑。在选定优化的退火温度下做标准曲线。
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8楼2013-08-05 23:56:37
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yqx2966895

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-06 09:43:39
理论上引物的退火温度即最适温度为引物配方上的推荐温度减去5/6度，具体一点的要自己按照梯度设计，或者样品选择设计。。。我懂的就这样，希望对你有帮助
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9楼2013-08-06 00:10:09
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jue9958

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yqx2966895 at 2013-08-06 00:10:09
理论上引物的退火温度即最适温度为引物配方上的推荐温度减去5/6度，具体一点的要自己按照梯度设计，或者样品选择设计。。。我懂的就这样，希望对你有帮助

谢谢你。
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10楼2013-08-06 11:00:54
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