应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体的洗涤
61/1返回列表
查看: 2395  |  回复: 13
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

coffee159

金虫 (小有名气)

[求助] 包涵体的洗涤已有3人参与

高手们，本人是准研一的，刚进实验室做实验。现在在做重组基因的原核表达，超声破碎细胞后用洗涤液洗包涵体，是洗掉一些膜碎片和膜蛋白吗？为什么每次洗过之后的上清和沉淀都要制样跑SDS-PAGE呢？还有，为什么包涵体跑电泳时会出现好多条带？谢谢你们了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-08-03 20:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-04 09:10:33
包涵体是复合体，其顽固程度不同，在洗涤buffer加以超声处理过程中难免部分会被打散，溶解！...

你好，要是包涵体洗过之后，要想检验是否洗干净，我跑蛋白胶，怎样的结果是说明我洗干净了呢？
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-18 09:58:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Sthunder at 2014-07-19 04:16:08
洗后，上清拿去跑胶，如果上清基本没蛋白了就说明差不错了，但实际意义不大。因为，洗涤后最终还是要过柱才能得到纯蛋白。...

奥，这个我是知道的，可是我的最终沉淀跑胶发现杂带还是很多，每次洗涤的上清跑胶发现根本没有东西，这是什么原因呢？
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-21 08:46:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 王小蒙602 at 2014-07-18 14:45:18
目标条带纯度越高，就说明洗得约感觉啊

我的是洗过之后还是有杂带，没找到原因呢
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-21 08:48:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马海云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 王小蒙602 at 2014-07-21 13:05:36
加SDS或者用低浓度的尿素来洗...

我之前洗就是用尿素，就是没洗干净。现在找到原因了，是超声破碎次数太少，没有破碎完全。我的目的蛋白与菌体蛋白之间结合紧密，必须增加破碎次数才可以。
赞一下 回复此楼
13楼2014-07-27 09:37:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马海云

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by Sthunder at 2014-07-22 00:41:39
上清没东西，说明可溶蛋白已经没了，接下来就过柱就好！如果你过柱后所得蛋白还是多带的话，就有可能是多聚体，或者纯化过程需要改进...

恩啊 我现在找到原因了，是超声破碎次数太少，没有破碎完全。我的目的蛋白与菌体蛋白之间结合紧密，破碎次数少，没有分开所以洗的时候不容易洗下来！
赞一下 回复此楼
14楼2014-07-27 09:39:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 coffee159 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭