应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氨氧化细菌PCR结果
111/2返回列表12下一页
查看: 1670  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zx1990

金虫 (小有名气)

[求助] 氨氧化细菌PCR结果 已有1人参与

求教诸位大神，我做的安氧化细菌，PCR的结果有很明显的非特异性扩增，根据计算退火温度应该子啊54到56度之间，我做了55,56,57，结果都有非特异性扩增，56度的结果还很明显，不知道有没有人遇到过这种情况，用的引物是amoA1F和amoA2R。我 要做克隆，可不可以忽略非特异性扩增，直接切我的目的片段？
氨氧化细菌PCR结果
退火温度562013-07-23 13hr 00min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-23 15:03:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 秋之静美 at 2014-07-30 10:24:55
你好，你的氨氧化细菌PCR条件摸好了吗？我也再做，同求...

按这个条件，还是有非特异性扩增，只能割胶纯化，做克隆还是可以的
氨氧化细菌PCR结果-1
氨氧化细菌PCR条件.jpg
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-08-05 22:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wwb95599

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议楼主继续提高退火温度，看特异性是否会消失。直接切应该也是可以的，但是个人感觉楼主的胶应该不好切下来。。。
赞一下 回复此楼
只要路是对的，就不怕路远．
2楼2013-07-23 15:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwb95599 at 2013-07-23 15:17:33
建议楼主继续提高退火温度，看特异性是否会消失。直接切应该也是可以的，但是个人感觉楼主的胶应该不好切下来。。。

一般退火温度可以提高到什么程度呢？
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-23 18:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwb95599

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zx1990 at 2013-07-23 18:55:53
一般退火温度可以提高到什么程度呢？...

做一个梯度，上下１０度都可以，刚开始设计时候可以给温度梯度设计的稍微大些，然后再缩少也可以．
不过楼主要先确定引物设计是否正确，建议先BLAST下．
赞一下 回复此楼
只要路是对的，就不怕路远．
4楼2013-07-26 17:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wwb95599 at 2013-07-26 17:05:18
做一个梯度，上下１０度都可以，刚开始设计时候可以给温度梯度设计的稍微大些，然后再缩少也可以．
不过楼主要先确定引物设计是否正确，建议先BLAST下．...

可否告知具体如何操作才能确定引物正确与否？
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-27 09:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR可以采用两步，也就是说退火延伸一起进行。至于你的实验，我看你两条带亮度差不多，所以我估计很难通过提高退火温度来消除非特异条带。不过你完全可以直接回收目的条带进行下游实验，由于两条带大小差异不大，所以建议跑2%的胶，如果还分不清的话，切胶的时候小心，并跳去克隆是做个PCR，看看大小，记得做对照。Good luck！
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
6楼2013-07-27 11:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 11:17:45
PCR可以采用两步，也就是说退火延伸一起进行。至于你的实验，我看你两条带亮度差不多，所以我估计很难通过提高退火温度来消除非特异条带。不过你完全可以直接回收目的条带进行下游实验，由于两条带大小差异不大，所 ...

嗯，我也是这样做的，结果回收的目标条带浓度很低，没办法做后续的克隆，伤心欲绝，我觉得PCR欺骗了我，明明做20ul体系条带挺亮的，结果做到40ul就不亮了
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-28 07:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swach

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，你好，我现在也要做氨氧化细菌，引物和你选择的一样。不知道你用的反应条件是什么？可以给我分享下吗？我用文献中的条件进行PCR，也出现了两条条带。PCR扩增长度应该是490bp吧，谢谢楼主。
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-08 18:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋之静美

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by swach at 2014-07-08 18:23:52
楼主，你好，我现在也要做氨氧化细菌，引物和你选择的一样。不知道你用的反应条件是什么？可以给我分享下吗？我用文献中的条件进行PCR，也出现了两条条带。PCR扩增长度应该是490bp吧，谢谢楼主。

你好，你的氨氧化细菌PCR条件摸好了吗？我也再做，同求
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-30 10:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zx1990 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭