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浅小尘木虫 (正式写手)
麦兜
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[求助]
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量问题，附有具体方法，做时出问题，不知原因请大家多指教。
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（1）标准蛋白质溶液，用 牛血清白蛋白(BSA) ，配制成1.0mg/ml标准蛋白质溶液 （2）考马斯亮兰G —250染料试剂：称100mg 考马斯亮兰G—250 ，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1 升。 （3）取10 支试管，1 支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0 、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml 。最后各试管中分别加入5.0ml 考马斯亮兰G —250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合。 （4）加完试剂2~5 分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595 ，空白对照为第1 号试管，即0.1mlH2O 加5.0mlG—250 试剂。 （5）用标准蛋白质量（u g ）为横座标，用吸光度值A595 为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。 求高手指点我的过程有没有错误。非常感谢 测试完成以后 发现问题如下：1、第一个加了0.01ml标准蛋白质溶液在595nm处的吸光度为负值，不知道原因，求高手解答。整体符合递增。 2、我测得未知蛋白是转铁蛋白的浓度，标准曲线也要用牛血清白蛋白来做吗？可以用转铁蛋白来做吗？求高手解答 3、配置的标准蛋白以及G-250应当如何保存？可以重复使用吗？求高手解答？ 附件是我测试所用的具体方法与步骤。 |
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2013-07-15 22:54:21, 206.4 K
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9楼2015-10-26 10:38:27
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