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yinxiaoli8木虫 (正式写手)
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关于蛋白酶解
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求助求助，各位做蛋白相关的都来看看 我做了一个α-乳白蛋白的酶解，在加入DTT和IAA之后，有部分蛋白沉淀出现了，然后我又做了一个不加DTT和IAA直接酶解的样本，这两种样本我都进了质谱，可是信号不是很理想。 我想问下专业的同志们，这两种的酶解理论上是不会有太大区别的吧？ |
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2楼2013-07-15 07:38:44
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5楼2013-07-15 21:42:05
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yinxiaoli8: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-16 16:13:54
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DTT用于打断二硫键，IAM用于烷基化，防止打断的二硫键重连。 lz你这蛋白多大？疏水性会不会很强？ 越大的蛋白，或者疏水性越强的蛋白，越难切。 在酶切前，要经过变性，如果蛋白很难搞，变性剂要加比较强的比如说Guanidine HCl，然后再分别加DTT和IAM，但是，变性剂其实也会影响酶活。。。你后面的酶切也有可能受影响。 有许多需要考虑的东西，最好先找你这个蛋白别人的文献条件，按别人的条件先做做。 另外，要进质谱，信号不太好？ESI源还是MALDI源？你流动相用的FA还是TFA？ |
6楼2013-07-16 11:50:19
seallinsky
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yinxiaoli8
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