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简佳爱学

新虫 (小有名气)

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[求助] 在做霉菌PCR时，遇到很多问题，求助！！！！已有1人参与

我最近在做霉菌的分子鉴定，提取DNA用的是真菌DNA提取试剂盒，第一次提取的时候，提取DNA后，电泳检测了浓度，几乎看不到条带，但是PCR的结果还不错。后来，再提取DNA的时候，都没有进行浓度检测，直接PCR扩增，但是，越做效果越不好，80%都扩增不出来。
今天早上，我把之前提取的DNA进行了电泳检测，条带很暗，或者看不到，但是在这些当中，有的菌虽然DNA浓度低，但是PCR结果还挺好的，所以，我现在不知道问题出在哪里。有没有谁做过或者遇到过这样的问题呢，请多给建议呀！！

PS：我在提取DNA的时候，没有进行研磨，直接刮下孢子粉末，加裂解液，然后就按照试剂盒说明书提取了

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1楼 2013-07-12 10:44:16

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简佳爱学

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引用回帖:

4楼: Originally posted by lipeijun2010 at 2013-07-12 11:54:03
我们用的是天根的植物提取试剂盒，PDA液体培养基培养3天，液氮研磨，效果还可以，DNA浓度达到50ug/mL

谢谢

我现在用的是bioflux的真菌DNA提取试剂盒，本来想着培养在固体培养基上，可以直接挂下孢子，不用研磨；用液体培养的话，菌体都长在一起，很厚一层，应该要研磨，那请问，您最后在溶解DNA时，用的多少体系呢，PCR时模板一般用多少呢。我现在都是用100ul溶DNA，模板就是2ul，但是有时候能扩增出来，有时候又不好