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水穷云起时

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解惑：酶的活性和蛋白的表达有怎样的区别

本人最近一直在做酶的实验，发现有的酶投反应后活性不太好，但做电泳实验发现蛋白的表达还可以，一直不知道到底是哪里出现了问题，求各位走过路过的大侠指点迷津吧Sample TextSample TextSample TextSample TextSample TextSample Text
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
1楼 2013-07-08 17:05:22
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
表达纯化出来的酶蛋白会失活或者直接就是形成部分或全部没有活性形式的蛋白。
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为什么
2楼2013-07-08 17:14:31
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水穷云起时

新虫 (初入文坛)
★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖，多来生物科学版发帖！ 2013-07-08 17:35:38
引用回帖:
2楼: Originally posted by 547star at 2013-07-08 17:14:31
表达纯化出来的酶蛋白会失活或者直接就是形成部分或全部没有活性形式的蛋白。

不是分离纯化出来酶，是经过改造后的细菌，酶在细菌里
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
3楼2013-07-08 17:25:55
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 水穷云起时 at 2013-07-08 17:25:55
不是分离纯化出来酶，是经过改造后的细菌，酶在细菌里...

也会有部分表达有活力，有部分是形成没有活力的，比如有二硫键的蛋白，可以通过比较天然蛋白与重组蛋白比活力来估算。另外，虽然是胞内酶，缓冲液和离子种类‘浓度等还是会影响酶活性。
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为什么
4楼2013-07-08 18:03:28
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易水寒明

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-09 08:20:59
我不知道你是原核表达系统还是真核表达系统，一般酶的活性和蛋白的表达还是有区别的，你可以尝试采用该酶的上游蛋白激活该酶的活性后在分离提纯。另外，我也想请教一下一般酶的活性测试都采用那些方法？哪位大侠知道?
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5楼2013-07-08 21:12:35
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水穷云起时

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2013-07-08 18:03:28
也会有部分表达有活力，有部分是形成没有活力的，比如有二硫键的蛋白，可以通过比较天然蛋白与重组蛋白比活力来估算。另外，虽然是胞内酶，缓冲液和离子种类‘浓度等还是会影响酶活性。...

谢谢
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
6楼2013-07-09 18:04:33
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水穷云起时

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 易水寒明 at 2013-07-08 21:12:35
我不知道你是原核表达系统还是真核表达系统，一般酶的活性和蛋白的表达还是有区别的，你可以尝试采用该酶的上游蛋白激活该酶的活性后在分离提纯。另外，我也想请教一下一般酶的活性测试都采用那些方法？哪位大侠知道 ...

我是采用改进后的大肠杆菌，我们测酶的活性是用的紫外分光光度计测它的吸光度，看DO值是否在范围内，然后就是做反应，看酶的活性怎样
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
7楼2013-07-09 18:07:47
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