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yuanzou2011

新虫 (初入文坛)

[求助] EHA105农杆菌转化 已有2人参与

已经构建好的载体(测序结果正确)转化农杆菌,在LB+50mg/ml Rif(利福平) +50mg/ml Spe平板上长出,挑取单一菌落,在LB+50mg/ml Rif(利福平)+ 50mg/ml Hyo(潮霉素)+ 50mg/ml Kam(卡那霉素)的液体培养基中培养,但是培养2天都还感觉不浑浊。EHA105抗利福平和Spe,我的载体抗潮霉素和卡那霉素。就我现在的经验,分析不出问题的原因,求各位大虾们指点
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zl/Sophia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我现在要制作农杆菌EHA105感受态,使用LB培养基,添加Rif 50mg/L,在28度培养,可是培养好几天了OD值始终达不到0.3~0.5,只培养农杆菌就花费了两周,是怎么回事呢?哪出了问题,请教各位前辈指点一二!也请问楼主有没有遇到这个情况!是抗生素加多了吗?
9楼2014-08-21 10:50:00
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 学习下 2013-07-08 08:08:22
yuanzou2011: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-08 14:31:00
转化后楼主为什么不使用Rif+Spe+Kam这样组合的平板,菌株抗rif+Spe的话,只在Rif+Spe平板上你怎么确定是阳性菌落?
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-07-08 03:03:01
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yuanzou2011

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-07-08 03:03:01
转化后楼主为什么不使用Rif+Spe+Kam这样组合的平板,菌株抗rif+Spe的话,只在Rif+Spe平板上你怎么确定是阳性菌落?

那平板上还需要加Hyo吗?
3楼2013-07-08 08:40:47
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yuanzou2011: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-08 14:31:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuanzou2011 at 2013-07-08 08:40:47
那平板上还需要加Hyo吗?...

平板肯定要加载体抗性的物质才能起到筛选作用啦,你用错抗性了哈
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-07-08 11:01:43
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