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关于IRES-EGFP片段克隆
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最近因为项目需要，在克隆IRES-EGFP片段，质粒来源于北京天恩泽公司，但是PCR出现很奇怪的现象。 问题描述： 1、起初引物能很好的扩增出片段，但是同样的实验条件后期就出不来任何条带，模板也是重新提取的新鲜质粒。 2、在获得的片段经过测序后发现上下游引物部分序列与原始序列相同，但中间有近600个bp是完全不对的，blast后发现是Gene-trapping transposon vector pUPATrap-TMat的片段，我用的是DH5α的大肠杆菌。 那有做过这个克隆的朋友，是否也遇到这样的问题？如何解决？谢谢啦~ |
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