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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

[求助] 透析袋浓缩蛋白出现沉淀

用镍柱进行纯化后,由于样品的体积太大,就用PEG8000对蛋白进行了浓缩,可是发现浓缩时出现了沉淀,透析袋的截留分子量为14000D,为什么会出现沉淀呢?沉淀蛋白的会不会变性?重新稀释蛋白还可以再用吗?PEG8000会不会进入透析袋内啊?
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 学习下 很不错的建议 2013-06-24 08:00:23
liuxiuaza: 金币+2 2013-06-24 11:27:44
你用PEG8000.而透析袋是14000,肯定有部分PEG能进去啊!应该选用小的透析袋,如3000的。
出现沉淀未必就是你的目的蛋白,最好离心之后上清和沉淀分别跑胶看一下。
你镍柱之后应该先彻底把咪唑透析了再做其它处理,有咪唑在,特别容易出现絮凝。
2楼2013-06-24 07:57:26
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-24 07:57:26
你用PEG8000.而透析袋是14000,肯定有部分PEG能进去啊!应该选用小的透析袋,如3000的。
出现沉淀未必就是你的目的蛋白,最好离心之后上清和沉淀分别跑胶看一下。
你镍柱之后应该先彻底把咪唑透析了再做其它处理, ...

谢谢啊,我跑个胶试一下吧
3楼2013-06-24 11:28:14
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