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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 透析袋浓缩蛋白出现沉淀
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

[求助] 透析袋浓缩蛋白出现沉淀

用镍柱进行纯化后，由于样品的体积太大，就用PEG8000对蛋白进行了浓缩，可是发现浓缩时出现了沉淀，透析袋的截留分子量为14000D，为什么会出现沉淀呢？沉淀蛋白的会不会变性？重新稀释蛋白还可以再用吗？PEG8000会不会进入透析袋内啊？
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1楼 2013-06-23 20:06:09
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 学习下 很不错的建议 2013-06-24 08:00:23
liuxiuaza: 金币+2 2013-06-24 11:27:44
你用PEG8000.而透析袋是14000，肯定有部分PEG能进去啊！应该选用小的透析袋，如3000的。
出现沉淀未必就是你的目的蛋白，最好离心之后上清和沉淀分别跑胶看一下。
你镍柱之后应该先彻底把咪唑透析了再做其它处理，有咪唑在，特别容易出现絮凝。
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2楼2013-06-24 07:57:26
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-24 07:57:26
你用PEG8000.而透析袋是14000，肯定有部分PEG能进去啊！应该选用小的透析袋，如3000的。
出现沉淀未必就是你的目的蛋白，最好离心之后上清和沉淀分别跑胶看一下。
你镍柱之后应该先彻底把咪唑透析了再做其它处理， ...

谢谢啊，我跑个胶试一下吧
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3楼2013-06-24 11:28:14
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