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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

[交流] Western Blotting在怎样的环境温度下做结果比较好？

正要学做WB，有人说如果实验室没有空调，这个天太热，效果不好。还有人说天热做效果更好。
我没有实际做过WB，猜测他们说的在WB的不同步骤适合在不同温度下进行。
求教各位高手，温度对WB的影响，并恳请各位高手点拨WB成败的关键点和注意事项，谢谢！！！

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1楼 2013-06-18 12:00:23

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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

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小毛孩24: 金币+2 2013-06-20 09:06:10

凝胶是越热凝的越快，但肯定不是好事，跑胶的时候因为有电流自己会产热，小蛋白不怎么受影响，如果大蛋白最好放4°跑，温度常温就可以，25℃吧

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2楼2013-06-18 14:45:23

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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小毛孩24: 金币+5 2013-06-20 09:06:17

如果你指狭隘的WB，抗体孵育一般是在室温下进行的。温度较高时结合速度比较快。
如果你指从提取样品、跑胶、转膜都算是的话，当然有些步骤最好在低温下进行。比方说你的样品做超声一般是在冰浴条件下的。跑胶的速度快时会产生大量的热，最好用恒温水浴或者是低温层析柜里进行。湿法转膜时的电流比较大，也最好在低温下进行。

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3楼2013-06-19 04:11:07

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