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[交流] Western Blotting在怎样的环境温度下做结果比较好?

正要学做WB,有人说如果实验室没有空调,这个天太热,效果不好。还有人说天热做效果更好。
我没有实际做过WB,猜测他们说的在WB的不同步骤适合在不同温度下进行。
求教各位高手,温度对WB的影响,并恳请各位高手点拨WB成败的关键点和注意事项,谢谢!!!
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
祝福,祝您前程似锦,同时坚持每天访问论坛领取红包!
4楼2013-06-19 04:17:32
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)


★ ★ ★
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小毛孩24: 金币+2 2013-06-20 09:06:10
凝胶是越热凝的越快,但肯定不是好事,跑胶的时候因为有电流自己会产热,小蛋白不怎么受影响,如果大蛋白最好放4°跑,温度常温就可以,25℃吧
2楼2013-06-18 14:45:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小毛孩24: 金币+5 2013-06-20 09:06:17
如果你指狭隘的WB,抗体孵育一般是在室温下进行的。温度较高时结合速度比较快。
如果你指从提取样品、跑胶、转膜都算是的话,当然有些步骤最好在低温下进行。比方说你的样品做超声一般是在冰浴条件下的。跑胶的速度快时会产生大量的热,最好用恒温水浴或者是低温层析柜里进行。湿法转膜时的电流比较大,也最好在低温下进行。
3楼2013-06-19 04:11:07
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wtery

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
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小毛孩24: 金币+5 2013-06-20 09:06:24
实验过程中会产生大量热,当然是温度第一点比较好,尤其是电泳和转膜在冰浴中比较好,
有人说天热点好,可能说的是抗体孵育的时候,可能温度对蛋白质的相互作用有影响,不过温度太高了也不好
6楼2013-06-19 14:59:15
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