| 查看: 1612 | 回复: 2 | |||
[交流]
质粒的线性化与转染效率 已有2人参与
|
|
质粒DNA经转染进入细胞后，仅有一部分被转运到细胞核内进行转录并最终输出mRNA到细胞质进行蛋白合成。转入基因的表达通常可以在1－4天内可以检测到。一周后，由于大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释，因此，也就检测不到其存在了。 转染可以分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染（transient transfection）指的是转染的核酸不整合到染色体上，结果是短暂的高水平表达，可在24—96小时内检测表达效果，表达水平与位置无关，不会受到周围染色体元件的影响。瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定转染少，但因为DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大，不长久也不稳定。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。瞬时表达适合研究启动子等调控元件。稳定转染指的是转染的质粒DNA整合到染色体上，或者相当于附加子（episome）可持续存在，使得转染的细胞可长期表达。外源基因整合的几率很小，要获得稳定转染的细胞株，通常需要有筛选标记（比如抗性基因）共同转染，通过选择压力维持表达的稳定，不能通过的就被干掉了。质粒整合到染色体上本来就是件稀罕事儿，平均万分之一的几率，如果是线性化DNA转染，那整合的几率就高多了。不过再怎么整合也就是一个或者有限的几个拷贝，所以表达量往往不会太高。但是，“压倒一切的是'稳定'”，很多时候，转染后往往要进行稳定表达的筛选。例如，常用G418进行筛选，用以获得稳定的细胞系。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有54人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细胞瞬时转染和质粒复制
已经有23人回复
- RNA干扰实验是直接转染RNA还是转染表达该RNA的质粒？
已经有7人回复
- 脂质体稳转细胞的问题！！！！！！
已经有9人回复
- 请问什么大鼠细胞系比较好养，转染效率高？ 急！！
已经有4人回复
- 大肠杆菌CaCl2法转染质粒DNA需要注意哪些方面？
已经有7人回复
- 细胞稳定转染，质粒的设计
已经有15人回复
- 逆转录病毒载体的质粒是否可用普通的方法做转染？？
已经有4人回复
- 质粒转染成功后质粒小提出现了问题
已经有4人回复
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- miRNA质粒转染
已经有7人回复
- 【求助/交流】转染pNFκB-luc(报告基因质粒)需要共转染一个内参质粒的作用
已经有7人回复
- 【求助/交流】质粒经脂质体介导转染后的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】求助：Western检测转染质粒在细胞内的表达
已经有4人回复
- 【求助/交流】G418筛选稳定转染
已经有12人回复
- 关键词：癌细胞+普通细胞+转染效率区别
已经有7人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
loop00
木虫 (小有名气)
阿凡达
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1553.3
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 299
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 466614
- 注册: 2007-11-24
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
2楼2013-06-18 19:33:16
huoyongting
金虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 982.1
- 散金: 41
- 红花: 6
- 帖子: 392
- 在线: 110.2小时
- 虫号: 1351186
- 注册: 2011-07-20
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
3楼2013-06-19 11:01:20