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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 原核表达做不出来了!

去年构建了重组菌做原核表达,载体是pET28a,宿主菌是BL21,诱导都能得到高浓度的蛋白,之前只是纠结纯化结果不是很理想,谁知道最近一个多月,做了很多次表达,都不能表达出目的蛋白,送测序又没有问题,快崩溃了!
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你的日子如何,你的力量也必如何!
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-07 16:16:21
做个对照看看是不是IPTG诱导有问题,还有是不是你的stock中质粒丢失了

请问怎么设对照?是拿别的重组菌做对照吗?
菌株测序没问题,是否也是会存在质粒丢失的情况?
你的日子如何,你的力量也必如何!
9楼2013-06-07 23:28:44
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 11:46:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:33:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:36:53
重新转化一下,你的细胞,千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的,哪有之前可以表达现在不能表达啊。
2楼2013-06-06 10:01:29
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Bio海盗路飞

木虫 (小有名气)

是不是诱导剂出问题了?
努力工作,让自己每天都能进步!
3楼2013-06-06 15:55:42
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:30:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-10 16:59:12
有可能是渗漏表达的影响,重新提质粒、转化,再进行表达。
小兵一个
4楼2013-06-06 16:50:06
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