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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达做不出来了！
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 原核表达做不出来了！

去年构建了重组菌做原核表达，载体是pET28a，宿主菌是BL21，诱导都能得到高浓度的蛋白，之前只是纠结纯化结果不是很理想，谁知道最近一个多月，做了很多次表达，都不能表达出目的蛋白，送测序又没有问题，快崩溃了！
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2013-06-06 09:02:31
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-06-06 16:50:06
有可能是渗漏表达的影响，重新提质粒、转化，再进行表达。

请问什么是渗漏表达？很惭愧虽然做这一块很久了，但一直停留在操作水平上，对原理其实还是很不懂，特别是遇到问题的时候就不知道怎么分析了
之前也是听说过重新转化就好了，请问这可能是什么原因？老板问起来的时候回答得很心惊胆战啊
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2013-06-07 23:30:49
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 11:46:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:33:34
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:36:53
重新转化一下，你的细胞，千万别使用错细胞一定是DE3溶源菌。这种情况很少的，哪有之前可以表达现在不能表达啊。
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2楼2013-06-06 10:01:29
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Bio海盗路飞

木虫 (小有名气)
是不是诱导剂出问题了？
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努力工作，让自己每天都能进步!
3楼2013-06-06 15:55:42
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sxxuan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-07 23:30:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:59:12
有可能是渗漏表达的影响，重新提质粒、转化，再进行表达。
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小兵一个
4楼2013-06-06 16:50:06
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