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245087116

新虫 (初入文坛)

[求助] 直接反转录的DNA可以与载体直接连接吗

直接反转录的DNA,即还没进行后续特异引物PCR,只是cDNA可以与载体连接吗?谢谢高位高手指点迷津!
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710002191

银虫 (小有名气)

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应该可以吧,我看师兄做的实验就是反转录然后直接连接转化呀
may
2楼2013-05-11 21:16:28
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酶切专家

金虫 (小有名气)

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245087116(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-12 14:30:27
gyesang: 回帖置顶 2013-05-12 14:30:29
当然不行,反转录之后是单链的cDNA,只有PCR之后才能形成双链DNA,进而克隆
3楼2013-05-11 21:37:54
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245087116

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-11 21:37:54
当然不行,反转录之后是单链的cDNA,只有PCR之后才能形成双链DNA,进而克隆

我想 cDNA不是一RNA为模板扩怎的RNA-DNA双链吗··· 难道不行吗?
4楼2013-05-11 21:42:25
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千里两句

新虫 (小有名气)

大哥,不会是RNA-DNA双链吧!不是有处理掉cDNA上结合的RNA么????
5楼2013-05-11 21:45:26
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千里两句

新虫 (小有名气)

这样做,有什么意义么????
6楼2013-05-11 21:46:21
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 710002191 at 2013-05-11 21:16:28
应该可以吧,我看师兄做的实验就是反转录然后直接连接转化呀

可能他用了一步法的试剂盒, 同一个管子里面RT完了紧跟PCR程序.
7楼2013-05-11 21:50:42
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245087116

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 千里两句 at 2013-05-11 21:45:26
大哥,不会是RNA-DNA双链吧!不是有处理掉cDNA上结合的RNA么????

要处理掉cDNA上结合的RNA吗?我按照试剂盒步骤没处理进行PCR也扩出来条带了啊?
8楼2013-05-12 11:45:07
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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载体是双链DNA,cDNA复制为成为双链DNA才可以连接到载体上。
9楼2013-05-12 18:17:20
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