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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 直接反转录的DNA可以与载体直接连接吗
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245087116

新虫 (初入文坛)

[求助] 直接反转录的DNA可以与载体直接连接吗

直接反转录的DNA，即还没进行后续特异引物PCR，只是cDNA可以与载体连接吗？谢谢高位高手指点迷津！
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1楼 2013-05-11 21:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该可以吧，我看师兄做的实验就是反转录然后直接连接转化呀
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may
2楼2013-05-11 21:16:28
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
245087116(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-12 14:30:27
gyesang: 回帖置顶 2013-05-12 14:30:29
当然不行，反转录之后是单链的cDNA，只有PCR之后才能形成双链DNA，进而克隆
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3楼2013-05-11 21:37:54
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245087116

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-11 21:37:54
当然不行，反转录之后是单链的cDNA，只有PCR之后才能形成双链DNA，进而克隆

我想 cDNA不是一RNA为模板扩怎的RNA-DNA双链吗··· 难道不行吗？
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4楼2013-05-11 21:42:25
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千里两句

新虫 (小有名气)
大哥，不会是RNA-DNA双链吧！不是有处理掉cDNA上结合的RNA么？？？？
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5楼2013-05-11 21:45:26
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千里两句

新虫 (小有名气)
这样做，有什么意义么？？？？
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6楼2013-05-11 21:46:21
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 710002191 at 2013-05-11 21:16:28
应该可以吧，我看师兄做的实验就是反转录然后直接连接转化呀

可能他用了一步法的试剂盒, 同一个管子里面RT完了紧跟PCR程序.
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7楼2013-05-11 21:50:42
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245087116

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 千里两句 at 2013-05-11 21:45:26
大哥，不会是RNA-DNA双链吧！不是有处理掉cDNA上结合的RNA么？？？？

要处理掉cDNA上结合的RNA吗？我按照试剂盒步骤没处理进行PCR也扩出来条带了啊？
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8楼2013-05-12 11:45:07
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体是双链DNA，cDNA复制为成为双链DNA才可以连接到载体上。
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9楼2013-05-12 18:17:20
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