24小时热门版块排行榜    

查看: 2619  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

[求助] 平板能长,挑单克隆却不长啊啊啊啊啊

小弟刚做的转化,平板长的很好,挑取单克隆到5ml LB中培养,长势不错,但后几次却不行(一个礼拜内),后有虫友说是杂菌污染了平板,那么我再次把上次做转化的EP管拿出来取100ul 涂布在Amp 100ug/ml的平板上(调大筛选压力),待平板长好后,昨天晚上挑单克隆到5ml  LB 中,今天早上还是澄清,我晕,出了鬼了,这是?~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2013-05-05 13:04:31
我一般用150的Amp浓度,而且Amp容易失活,平板最好不要放置时间太长。如你所述,涂板得到的克隆没有用菌落PCR或者普通PCR进行验证么?容易出现假阳性的克隆。

我是接手师兄做的,我并不知道质粒的确切信息,故难以做PCR鉴定,哎
7楼2013-05-06 13:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流,期待你的精彩1 2013-05-04 19:56:47
建议重新做一下转化,因为转化之后的菌保存较长时间里面的质粒可能会丢失!
做实验就是和上帝玩游戏!
2楼2013-05-04 19:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-27 17:00:58
转化时做负对照,不加DNA的感受态,熱激、复苏后涂抗amp板子,如果长菌落,说明抗性板的筛选压力不够。
3楼2013-05-05 02:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by senix at 2013-05-04 19:53:34
建议重新做一下转化,因为转化之后的菌保存较长时间里面的质粒可能会丢失!

才3-4天的事情呀,应该没这么快吧,我的Amp筛选压力已经提到100ug/ml了。
4楼2013-05-05 12:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +6 2117205181 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:59 by allen-yin
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
信息提示
请填处理意见