24小时热门版块排行榜    

查看: 14320  |  回复: 6

qiuyunhen

金虫 (小有名气)

[求助] PCR引物GC含量过低时候,如何调整PCR体系?

引物设计时候,一条引物CG含量55%,另一条只36%,这会不会影响PCR?做了三次PCR都没有任何条带。如何对PCR条件进行优化?
另外,两引物5"端添加酶切位点之后,引物的Tm值发生变化,并可能会发生错配,影响PCR产物的生成。如何对PCR条件进行优化?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

知识与经验是成长的基础
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纳米之心

木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qiuyunhen(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-04 19:22:04
GC含量低会导致引物耐高温能力下降,可能需要对PCR对的温度进行优化,或者在可能情况下,用一定量的GC替代AT!!!
火星人要回火星了!!!
2楼2013-05-04 16:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-05 10:39:24
qiuyunhen: 金币+4 2013-08-14 22:29:43
你PCR的模板是什么?你做PCR的目的是什么?设计引物的时候,上下游引物的GC含量相差尽量 不要太大,你接下来可以试下touchdown。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-05-04 19:23:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qiuyunhen(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-05 16:52:30
如果不想麻烦就touchdown PCR,如果求稳当设置梯度PCR,温度上下限时你两条引物的温度
4楼2013-05-04 20:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qiuyunhen(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-05 16:52:21
一般GC含量低的话把引物序列设计稍微长一点,就可以补偿Tm低的问题。你说的百分比差别也不是那么大。如果两个引物的tm不同,按照低的考虑PCR的退火温度。加酶切位点的引物的Tm需要按照不包含酶切位点的序列计算。
5楼2013-05-05 03:03:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xikexiao

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
qiuyunhen(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-05 16:52:47
本帖内容被屏蔽

6楼2013-05-05 10:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scilencing

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试试梯度PCR的策略
7楼2013-05-06 16:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiuyunhen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 07:03 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:51 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:24 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:11 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:27 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:11 by LH5NkK5Ud4bh
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:15 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
信息提示
请填处理意见