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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳
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foxhuli

木虫 (正式写手)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳

为什么我跑的电泳都没条带啊，第一次用的0.5的TBE，一点条带都看不到。然后我改进了一下，换成1的TBE，只能在末端看到mark的一点点影子，别的都没有影子，为什么啊
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酶切专家

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1楼 2013-04-27 20:49:45
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酶切专家

金虫 (小有名气)
送红花一朵
不会没加EB吧？
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2楼2013-04-27 21:54:32
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
祝福，祝福，祝福，祝一切顺利!
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3楼2013-04-27 23:04:45
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bradyluo

新虫 (小有名气)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励发帖讨论问题，0.5X TBE也是可以的！ 2013-04-28 02:27:43
TBE是跑蛋白用的电解液。跑DNA的话要用TAE！
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4楼2013-04-27 23:50:28
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8601

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by bradyluo at 2013-04-27 09:50:28
TBE是跑蛋白用的电解液。跑DNA的话要用TAE！

这个似乎不对，我们实验室跑DNA就是0.5xTBE。从来没发现有问题。
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5楼2013-04-28 02:20:45
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8601

金虫 (小有名气)
★ ★
foxhuli(gyesang代发): 金币+2, 鼓励交流！ 2013-04-28 02:28:29
你确定你用的是agarose,而不是agar?
如果没用错，建议彻底清洗一下跑胶的容器，确定没有DNase.
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6楼2013-04-28 02:22:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-28 11:06:30
marker跑不出来说明胶或者电泳体系有问题。你确定TBE buffer没有问题？此外，电泳指示剂在胶上跑得是否正常？
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7楼2013-04-28 03:15:25
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
foxhuli(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 13:29:48
这个染料的答案靠谱，DNA需要染色才能看到的！譬如gelred,gel gree, EB.
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8楼2013-04-28 03:16:34
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泰哥88

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
foxhuli(gyesang代发): 金币+1, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-28 13:29:37
是TBE的纯度不高，还有琼脂糖是不是现配的。
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9楼2013-04-28 08:35:36
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-28 11:06:43
本帖内容被屏蔽
10楼2013-04-28 10:00:51
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好好后生

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目测是没加染料啊，我用的就是0。5的TBE，没问题
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11楼2013-04-28 15:31:38
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
没有加染料吧
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12楼2013-04-28 15:34:02
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by bradyluo at 2013-04-27 23:50:28
TBE是跑蛋白用的电解液。跑DNA的话要用TAE！

谁说的？？？常用的就是TAE，TBE好么？
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13楼2013-04-28 15:35:05
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sc5921041

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by bradyluo at 2013-04-27 10:50:28
TBE是跑蛋白用的电解液。跑DNA的话要用TAE！

TBE 更好 只是TAE比较便宜好配置罢了...
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14楼2013-04-28 21:48:19
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 泰哥88 at 2013-04-28 08:35:36
是TBE的纯度不高，还有琼脂糖是不是现配的。

是的呀，不过我用的事1.5%，有同学说用1%的试试。
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15楼2013-04-28 23:04:51
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-04-27 21:54:32
不会没加EB吧？

方法有点不同，有的人是后来加EB染色，我们是在琼脂糖融化后，加的1.5ul染料，没注意是什么，师姐就是那么做的，前面跑rna都没问题的啊
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16楼2013-04-28 23:07:26
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yjqhades at 2013-04-28 10:00:51
0.5的TBE即可~楼主有没有加入核酸染料？电泳时间不要过长，以免marker跑出凝胶

时间应该是没问题的，因为能看得见LOADING BUFFER都没跑过头啊。我加了染料啊，两次都有问题，不知道是不是那个buffer过期或没放于4℃，今天各种重新配
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17楼2013-04-28 23:10:24
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-28 15:34:02
没有加染料吧

加了的啊，呜呜
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18楼2013-04-28 23:28:25
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莓林塔

木虫 (小有名气)
★ ★
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foxhuli(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-01 18:59:24
跑完的胶里有loading buffer的蓝色吗？   我有一次是因为胶做的太薄了，然后加样孔又太浅，孔在胶上面了你能明白么？？东西都飞出去了，换个厚点的胶就好了。
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19楼2013-04-28 23:31:06
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-04-27 21:54:32
不会没加EB吧？

EB 有毒是吧？我们在琼脂糖溶化后加了染料的，只是我也不知道是啥，以前也跑出来过。如果DNA参比有问题也不应该影响mark吧
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20楼2013-04-28 23:34:29
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foxhuli

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gzl9901 at 2013-04-27 23:04:45
祝福，祝福，祝福，祝一切顺利!

谢谢，主要是我还不太会，师姐也很少做，且压根没碰见过这个问题的呀
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21楼2013-04-28 23:36:05
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日记布

金虫 (正式写手)
★
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逆浓度配大了吧，我配的是0.2的
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22楼2013-04-29 17:05:15
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zhangquan084

木虫 (正式写手)
可能是胶的问题
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23楼2013-04-29 21:47:26
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hanko00

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
必须加染色啊，不然怎么能看到，就算前面忘加了，也要在跑胶的时候加进去！
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24楼2013-05-01 12:37:41
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bradyluo

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 8601 at 2013-04-28 02:20:45
这个似乎不对，我们实验室跑DNA就是0.5xTBE。从来没发现有问题。...

那就不知道了。我们的TAE都是50X的。而且跑DNA都是TAE
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25楼2013-05-03 10:37:54
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