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lee_炎

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,质粒电转染相关问题。

最近做电转染,将GFP质粒转染到细胞中。结果发现将电击后的细胞转移到孔板上后,细胞都死掉了。也许这是电压高的原因,但我在做的过程中有些步骤有很大问题,希望大家能提点建议或意见。

比如:电击后将细胞转移到孔板的时候,由于用的是0.2cm的电击杯,所以无法将里面的细胞完全吸出来,这也就会导致细胞损失,我想这一步会不会损失很多细胞呢,请问大家都是用什么方法转移的呢?

另外,在将细胞离心沉淀,然后离心,清洗再离心的这一步,大家是如何做才能让细胞的损失降到最低呢?

实验不顺利,好纠结啊。。。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电击后应该立即加入培养液,否则细胞死得很快的。我用的是玻璃吸管,伸到0.2cm的杯子底部完全没有问题。一般有两个做法,一个是直接往电击杯里加1ml培养液,然后再转移到试管里复苏。一个是快速用消毒好的玻璃吸管转移到装有1ml培养液的试管里进行复苏。
2楼2013-04-27 09:13:02
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
3楼2014-05-24 21:35:44
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