24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2357  |  回复: 19

小科研女dow

木虫 (小有名气)

[求助] 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..

各位亲们,这几天做了毕赤酵母的诱导表达,表达完后将上清和沉淀都用loading buffer处理100℃煮沸10min跑电泳,发现参照什么条带也没有,其他样品沉淀也没有条带,上清中也只是微微的一个带,且不是我的蛋白大小,如图所示,希望大家帮我分析一下,不胜感激

7DW3$8OBQU[`(@3K%J7H8FU.jpg
回复此楼
做出色的科研人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

此外,参照和样品都检测到了一定的活性,在液相下。
做出色的科研人
2楼2013-04-23 10:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小科研女dow: 金币+2, 有帮助, 你是说煮沸有问题?上了20ul 不少吧? 2013-04-23 16:18:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流,期待你的精彩1 2013-04-24 08:39:39
觉得是细胞破碎有问题,或者是上样量不够。
3楼2013-04-23 14:49:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

4楼2013-04-23 21:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:49:38
觉得是细胞破碎有问题,或者是上样量不够。

你用了多少细胞,用多少体积的loading buffer煮的?
5楼2013-04-24 03:48:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-24 03:48:21
你用了多少细胞,用多少体积的loading buffer煮的?...

200ul上清+30ul loading buffer 上样20ul
1ml沉淀用120ul loading buffer 上样5ul
都煮沸了10min
做出色的科研人
6楼2013-04-24 10:26:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-24 10:26:38
200ul上清+30ul loading buffer 上样20ul
1ml沉淀用120ul loading buffer 上样5ul
都煮沸了10min...

不知道为什么没有带,至少应该有酵母本身的蛋白吧。一般用loading buffer煮沸应该没有问题。确定煮沸前沉淀样品完全重悬在buffer里了吗?不行的话试试加大上样量。
7楼2013-04-24 12:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小科研女dow: 金币+5, ★★★很有帮助, 嘿嘿额 谢啦 2013-04-24 20:23:33
胞内裂解不完全,核酸过多,另外上样量可能过多,跑出条带糊状
上清,酵母很多外源蛋白表达量都很低,胞外分泌的本底蛋白也很少,所以没有明显条带也很正常。可以考虑用TCA浓缩后上样。
我们实验室胞内裂解样是这样做的:1ml菌液离心,上清和菌体分开。菌体用1ml PBS重悬,取200ul 菌悬液+50ul 5*loading buffer  煮15-20min,12000rpm 离心10min
8楼2013-04-24 14:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)

胞内上样量8ul
9楼2013-04-24 14:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)

上清我们上样30ul
10楼2013-04-24 14:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小科研女dow 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +9 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:30 by 给你你注意休息
[考研] 322求调剂:一志愿湖南大学 材料与化工(085600),已过六级。 +9 XX小邓 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:18 by limeifeng
[考研] 材料调剂 +11 匹克i 2026-03-23 11/550 2026-03-30 17:05 by 晴空210210
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +6 萝卜炖青菜 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:30 by herarysara
[考研] 324求调剂 +9 hanamiko 2026-03-26 11/550 2026-03-30 14:27 by JourneyLucky
[基金申请] 面上5B能上会吗? +7 redcom 2026-03-29 7/350 2026-03-30 12:44 by 爱搞研究的小孩
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +10 Nadiums 2026-03-25 11/550 2026-03-30 11:56 by yjolah
[考研] 332求调剂 +6 Lyy930824@ 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:53 by 1172367218
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
信息提示
请填处理意见