应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2358  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

[求助] 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..

各位亲们，这几天做了毕赤酵母的诱导表达，表达完后将上清和沉淀都用loading buffer处理100℃煮沸10min跑电泳，发现参照什么条带也没有，其他样品沉淀也没有条带，上清中也只是微微的一个带，且不是我的蛋白大小，如图所示，希望大家帮我分析一下，不胜感激

7DW3$8OBQU[`(@3K%J7H8FU.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做出色的科研人
1楼 2013-04-23 10:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+5, ★★★很有帮助, 嘿嘿额 谢啦 2013-04-24 20:23:33
胞内裂解不完全，核酸过多，另外上样量可能过多，跑出条带糊状
上清，酵母很多外源蛋白表达量都很低，胞外分泌的本底蛋白也很少，所以没有明显条带也很正常。可以考虑用TCA浓缩后上样。
我们实验室胞内裂解样是这样做的：1ml菌液离心，上清和菌体分开。菌体用1ml PBS重悬，取200ul 菌悬液+50ul 5*loading buffer  煮15-20min，12000rpm 离心10min
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-24 14:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

小科研女dow

木虫 (小有名气)
此外，参照和样品都检测到了一定的活性，在液相下。
赞一下 回复此楼
做出色的科研人
2楼2013-04-23 10:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+2, ★有帮助, 你是说煮沸有问题？上了20ul 不少吧？ 2013-04-23 16:18:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-24 08:39:39
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 14:49:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:49:38
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。

你用了多少细胞，用多少体积的loading buffer煮的？
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-24 03:48:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学求调剂 +3 小黄鸭宝 2026-03-30 3/150 2026-03-31 08:40 by Awei099
[考研] 0703化学 +15 妮妮ninicgb 2026-03-27 15/750 2026-03-31 08:28 by yanflower7133
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +6 吃的不少 2026-03-30 6/300 2026-03-31 04:17 by fmesaito
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-29 5/250 2026-03-29 16:46 by 学员8dgXkO
[考研] 343求调剂 +5 爱羁绊 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:53 by 唐沐儿
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭