应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..
51/1返回列表
查看: 2311  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

[求助] 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..

各位亲们，这几天做了毕赤酵母的诱导表达，表达完后将上清和沉淀都用loading buffer处理100℃煮沸10min跑电泳，发现参照什么条带也没有，其他样品沉淀也没有条带，上清中也只是微微的一个带，且不是我的蛋白大小，如图所示，希望大家帮我分析一下，不胜感激

7DW3$8OBQU[`(@3K%J7H8FU.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做出色的科研人
1楼 2013-04-23 10:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+5, ★★★很有帮助, 嘿嘿额 谢啦 2013-04-24 20:23:33
胞内裂解不完全，核酸过多，另外上样量可能过多，跑出条带糊状
上清，酵母很多外源蛋白表达量都很低，胞外分泌的本底蛋白也很少，所以没有明显条带也很正常。可以考虑用TCA浓缩后上样。
我们实验室胞内裂解样是这样做的：1ml菌液离心，上清和菌体分开。菌体用1ml PBS重悬，取200ul 菌悬液+50ul 5*loading buffer  煮15-20min，12000rpm 离心10min
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-24 14:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

小科研女dow

木虫 (小有名气)
此外，参照和样品都检测到了一定的活性，在液相下。
赞一下 回复此楼
做出色的科研人
2楼2013-04-23 10:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+2, ★有帮助, 你是说煮沸有问题？上了20ul 不少吧？ 2013-04-23 16:18:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-24 08:39:39
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 14:49:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:49:38
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。

你用了多少细胞，用多少体积的loading buffer煮的？
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-24 03:48:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +6 ZY-05 2026-03-13 7/350 2026-03-18 12:57 by allen-yin
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +5 手机用户 2026-03-17 5/250 2026-03-18 12:49 by Linda Hu
[考研] 化学工程321分求调剂 +14 大米饭！ 2026-03-15 17/850 2026-03-18 12:40 by Linda Hu
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +6 Becho359 2026-03-11 6/300 2026-03-18 12:09 by djl2006
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +5 慕寒mio 2026-03-16 5/250 2026-03-17 21:31 by hmn_wj
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭