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小科研女dow

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by heroxuning at 2013-04-24 14:20:28
胞内裂解不完全,核酸过多,另外上样量可能过多,跑出条带糊状
上清,酵母很多外源蛋白表达量都很低,胞外分泌的本底蛋白也很少,所以没有明显条带也很正常。可以考虑用TCA浓缩后上样。
我们实验室胞内裂解样是这 ...

为什么我的酵母的正常蛋白也没条带呢?其他师姐做的条件一样 但是起码有杂带呀
做出色的科研人
11楼2013-04-24 20:24:48
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爱上文慧

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小科研女dow: 金币+3, ★★★很有帮助, ~~~ 2013-04-25 09:16:51
你有对照菌株吗,就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β-半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ,选择和你的菌株表型相同的那个作为对照,看看你的诱导条件是不是有问题,如果相同条件下,这个对照表达了而你的扔没有条带,那就是载体或你的蛋白的问题,如果对照都没有条带,可能就是你的诱导条件有问题了。
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
12楼2013-04-24 22:45:22
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样前测下蛋白浓度吧,上样量最好是知道浓度后计算微克数,这样上样能准确一些
13楼2013-04-24 23:40:41
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CarlJH

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一定活性是什么概念,表达量太低
14楼2013-04-24 23:54:51
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-24 22:45:22
你有对照菌株吗,就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β-半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ,选择和你的菌株表型相同的那个作为对照,看看你的诱导条件是不是有问题,如果相同条件下,这个对照表达了而你的扔没有条 ...

做了参照  最前面的就是 也没有条带..
做出色的科研人
15楼2013-04-25 09:18:39
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青蛙良

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-25 09:18:39
做了参照  最前面的就是 也没有条带.....

版主,你的问题找到解决方法了吗
乐观、自信、爱
16楼2015-03-11 21:36:43
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 青蛙良 at 2015-03-11 21:36:43
版主,你的问题找到解决方法了吗...

后来放弃了 在大肠中做出来了
做出色的科研人
17楼2015-10-23 17:25:37
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 小科研女dow at 2015-10-23 17:25:37
后来放弃了 在大肠中做出来了...

放弃了?
我做这个毕赤酵母也碰到一样的问题,胞外分泌表达一条带都没有,背景蛋白少应该多少有些啊,但是我的胶上是什么都没有。阳性对照也没有

没有诱导出来?但是我测了上清的R280,蛋白浓度非常高啊达到30mg/ml了
18楼2017-12-07 07:27:31
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-24 20:24:48
为什么我的酵母的正常蛋白也没条带呢?其他师姐做的条件一样 但是起码有杂带呀...

我也是一样的问题,杂带都没有
19楼2017-12-07 07:28:26
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-24 22:45:22
你有对照菌株吗,就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β-半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ,选择和你的菌株表型相同的那个作为对照,看看你的诱导条件是不是有问题,如果相同条件下,这个对照表达了而你的扔没有条 ...

我做这个毕赤酵母也碰到一样的问题,胞外分泌表达一条带都没有,背景蛋白少应该多少有些啊,但是我的胶上是什么都没有。阳性对照也没有

没有诱导出来?但是我测了上清的R280,蛋白浓度非常高啊达到30mg/ml了
20楼2017-12-07 07:28:38
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