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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..
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小科研女dow

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by heroxuning at 2013-04-24 14:20:28
胞内裂解不完全，核酸过多，另外上样量可能过多，跑出条带糊状
上清，酵母很多外源蛋白表达量都很低，胞外分泌的本底蛋白也很少，所以没有明显条带也很正常。可以考虑用TCA浓缩后上样。
我们实验室胞内裂解样是这 ...

为什么我的酵母的正常蛋白也没条带呢？其他师姐做的条件一样 但是起码有杂带呀
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做出色的科研人
11楼2013-04-24 20:24:48
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爱上文慧

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+3, ★★★很有帮助, ~~~ 2013-04-25 09:16:51
你有对照菌株吗，就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β－半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ，选择和你的菌株表型相同的那个作为对照，看看你的诱导条件是不是有问题，如果相同条件下，这个对照表达了而你的扔没有条带，那就是载体或你的蛋白的问题，如果对照都没有条带，可能就是你的诱导条件有问题了。
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每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
12楼2013-04-24 22:45:22
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样前测下蛋白浓度吧，上样量最好是知道浓度后计算微克数，这样上样能准确一些
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13楼2013-04-24 23:40:41
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CarlJH

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一定活性是什么概念，表达量太低
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14楼2013-04-24 23:54:51
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小科研女dow

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-24 22:45:22
你有对照菌株吗，就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β－半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ，选择和你的菌株表型相同的那个作为对照，看看你的诱导条件是不是有问题，如果相同条件下，这个对照表达了而你的扔没有条 ...

做了参照  最前面的就是 也没有条带..
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做出色的科研人
15楼2013-04-25 09:18:39
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青蛙良

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-25 09:18:39
做了参照  最前面的就是 也没有条带.....

版主，你的问题找到解决方法了吗
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乐观、自信、爱
16楼2015-03-11 21:36:43
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小科研女dow

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 青蛙良 at 2015-03-11 21:36:43
版主，你的问题找到解决方法了吗...

后来放弃了 在大肠中做出来了
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做出色的科研人
17楼2015-10-23 17:25:37
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 小科研女dow at 2015-10-23 17:25:37
后来放弃了 在大肠中做出来了...

放弃了？
我做这个毕赤酵母也碰到一样的问题，胞外分泌表达一条带都没有，背景蛋白少应该多少有些啊，但是我的胶上是什么都没有。阳性对照也没有

没有诱导出来？但是我测了上清的R280，蛋白浓度非常高啊达到30mg/ml了
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18楼2017-12-07 07:27:31
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-24 20:24:48
为什么我的酵母的正常蛋白也没条带呢？其他师姐做的条件一样 但是起码有杂带呀...

我也是一样的问题，杂带都没有
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19楼2017-12-07 07:28:26
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-24 22:45:22
你有对照菌株吗，就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β－半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ，选择和你的菌株表型相同的那个作为对照，看看你的诱导条件是不是有问题，如果相同条件下，这个对照表达了而你的扔没有条 ...

我做这个毕赤酵母也碰到一样的问题，胞外分泌表达一条带都没有，背景蛋白少应该多少有些啊，但是我的胶上是什么都没有。阳性对照也没有

没有诱导出来？但是我测了上清的R280，蛋白浓度非常高啊达到30mg/ml了
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20楼2017-12-07 07:28:38
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