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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

[求助] 【请教大家】毕赤酵母诱导完毕跑SDS电泳上清和沉淀都几乎没有任何条带..

各位亲们，这几天做了毕赤酵母的诱导表达，表达完后将上清和沉淀都用loading buffer处理100℃煮沸10min跑电泳，发现参照什么条带也没有，其他样品沉淀也没有条带，上清中也只是微微的一个带，且不是我的蛋白大小，如图所示，希望大家帮我分析一下，不胜感激

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做出色的科研人
1楼 2013-04-23 10:12:45
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小科研女dow

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-24 22:45:22
你有对照菌株吗，就是  含有白蛋白的GS115/His+Muts和含有 β－半乳糖苷酶的GS115/His+Mut+ ，选择和你的菌株表型相同的那个作为对照，看看你的诱导条件是不是有问题，如果相同条件下，这个对照表达了而你的扔没有条 ...

做了参照  最前面的就是 也没有条带..
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做出色的科研人
15楼2013-04-25 09:18:39
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小科研女dow

木虫 (小有名气)
此外，参照和样品都检测到了一定的活性，在液相下。
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做出色的科研人
2楼2013-04-23 10:14:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小科研女dow: 金币+2, ★有帮助, 你是说煮沸有问题？上了20ul 不少吧？ 2013-04-23 16:18:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-24 08:39:39
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。
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3楼2013-04-23 14:49:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:49:38
觉得是细胞破碎有问题，或者是上样量不够。

你用了多少细胞，用多少体积的loading buffer煮的？
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5楼2013-04-24 03:48:21
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