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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 诱导表达GST融合蛋白,结果分子量少了26KD,刚好是GST的分子量
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fu-guo-laing

新虫 (初入文坛)

[求助] 诱导表达GST融合蛋白,结果分子量少了26KD,刚好是GST的分子量

将目的基因插入到pGEX-4T-1载体上，然后将构建好的重组质粒转化入BL21（DE3）感受态细胞中，用终浓度为0.25mM的IPTG诱导表达6h。目的基因25KD，本来用IPTG诱导后应该表达的融合蛋白约为51KD，但是很奇怪，在进行SDS-PAGE时，在25KD处出现很明显的条带，而51KD处却无明显条带。貌似是GST被自动切除了，或者是启动子跳过GST而直接翻译目的基因了？这是什么原因呀，百思不得其解？？？测序表明重组质粒是没有错误的。。。
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1楼 2013-04-22 17:46:17
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
请问你这个问题解决了吗最后，我也碰见了一摸一样的，只表达了GST标签，测序是正确的。
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4楼2022-02-07 19:48:49
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励发贴交流，为楼主问题解决提供可能的线索！ 2013-04-23 14:34:40
我推测表达的是GST，而非你的目的基因，你可以再检查一下测序结果，以及读框是否正确，或者是你的目的蛋白在融合表达后出现降解等
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2楼2013-04-22 21:37:25
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fu-guo-laing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-04-22 21:37:25
我推测表达的是GST，而非你的目的基因，你可以再检查一下测序结果，以及读框是否正确，或者是你的目的蛋白在融合表达后出现降解等

测序结果是准确的，我估计可能如你所说是目的蛋白在融合表达后出现降解，但我非常疑惑的是为什么融合蛋白降解只降解目的蛋白部分而不降解GST部分呢？如果真的是目的蛋白在融合表达后出现降解，那请问有什么解决办法吗？
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3楼2013-04-24 10:48:01
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