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卷儿1988

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[求助] 请教有关活性电泳的问题

最近在做活性电泳，要检测透明质酸酶的活性，采用的是在分离胶中加入底物HA，活性电泳后孵育后进行染色，有酶的位置不能染色会显现出来。但是结果一直是酶跑不下去，一直处于上样孔下面的位置，试了各种电压都是这种状况，有没有高手帮忙分析一下啊？

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1楼 2013-04-09 18:56:28

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chengjg

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看看有没有电流啊还有溴酚蓝往不往下跑啊？

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2楼2013-04-10 08:55:06

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卷儿1988

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2楼: Originally posted by chengjg at 2013-04-10 08:55:06
看看有没有电流啊还有溴酚蓝往不往下跑啊？

有电流，溴酚蓝也往下跑，就是蛋白不动。

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3楼2013-04-10 08:58:44

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gaojuan1985

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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-15 09:47:22

你的蛋白的等电点与你用的缓冲液体系不匹配，换个缓冲液体系。上网查查，酸性蛋白和碱性蛋白适用的电泳体系是不一样的。

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4楼2013-04-10 09:59:45

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4楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-04-10 09:59:45
你的蛋白的等电点与你用的缓冲液体系不匹配，换个缓冲液体系。上网查查，酸性蛋白和碱性蛋白适用的电泳体系是不一样的。

有这个可能性，但是不知道现在这个酶的等电点，是否需要测一下，如何测，还请指点一下~

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5楼2013-04-10 10:28:59

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gaojuan1985

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩 2013-04-15 09:47:34

你是粗酶液，也不好测等电点。看看文献报道的这类酶大概是多少，另外，可以根据活性判断一下，在最适pH附近。

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6楼2013-04-10 17:45:52

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6楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-04-10 17:45:52
你是粗酶液，也不好测等电点。看看文献报道的这类酶大概是多少，另外，可以根据活性判断一下，在最适pH附近。

最适PH在5左右，与电泳结果不相符

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7楼2013-04-15 09:08:12

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liuxiaomei

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3楼: Originally posted by 卷儿1988 at 2013-04-10 08:58:44
有电流，溴酚蓝也往下跑，就是蛋白不动。...

是不是你的电极插反了？或者你应该跑低pH的电泳

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要是能再年轻几岁多好啊！

8楼2014-03-07 08:54:11

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