24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 904  |  回复: 1

变心的翅膀

木虫 (小有名气)

[求助] cDNA扩增效率如何优化。

各位虫友,我现在准备测序一个编码已知蛋白的端的DNA序列,我提取了mRNA(质量没有问题,尝试扩增其他基因都没有问题),然后逆转录为cDNA,以cDNA为模板扩增约1500bp的序列,每次扩增后条带都很淡,优化了很多条件还是不行(这个基因表达相对较低,但是可以检测到蛋白),我怎么才能使PCR扩增效率提高啊,希望各位虫友能都给予指点,非常感谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

男儿当自强
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

两个方法,1、优化PCR条件,因为你的片段比较长,你PCR的时候要多加点模板,把PCR体系放大一点,比如用50ul PCR体系,还有你的延伸时间放长一点,放到4-5分钟都没有问题的,循环数可以放到36个循环,这样扩增效率会高一点。
2、干脆不要优化PCR体系了,用一个巢式PCR多好,巢式PCR第二轮能得到巨量的片段!!
用心
2楼2013-10-16 15:45:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 变心的翅膀 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +11 小熊睿睿_s 2026-04-11 14/700 2026-04-12 16:12 by caiaijun80
[考研] 材料考研调剂 +26 云木达达 2026-04-11 28/1400 2026-04-12 14:29 by .卷心菜..
[考研] 290求调剂 +13 柯淮然 2026-04-12 15/750 2026-04-12 12:26 by laoshidan
[考研] 296求调剂 +8 汪!?! 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:02 by 逆水乘风
[考研] 化学308分求调剂 +22 你好明天你好 2026-04-07 24/1200 2026-04-11 11:14 by ChemPharm
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 362求调剂 +10 我要考大 2026-04-06 14/700 2026-04-10 17:00 by luoyongfeng
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +6 祁柒连 2026-04-06 6/300 2026-04-10 11:10 by Roomoo
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +20 慕绝cc 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 10:22 by xujun0624
[考研] 一志愿2110,化学学硕310分,本科重点双非求调剂 +18 努力奋斗112 2026-04-08 18/900 2026-04-09 23:28 by wolf97
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +33 刺痛jk 2026-04-06 34/1700 2026-04-09 18:31 by hy861222
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 求助071001调剂!!! +7 黄守松 2026-04-05 8/400 2026-04-09 09:07 by 徐良白眉大侠
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 一志愿哈工大,初试329,求环境科学与工程调剂! +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 338求调剂 +8 wxygxsaaaaa 2026-04-06 8/400 2026-04-08 06:58 by 无际的草原
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 一志愿武汉理工大学080200机械工程308分,求调剂 +4 终不似从前 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:46 by 考研学校招点人
信息提示
请填处理意见