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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何得到CDNA全长

我用同源克隆的方法得到了一个基因的DNA全长序列，可不可以用扩DNA时的引物来扩增CDNA呢？
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1楼 2013-04-07 16:30:45
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labixiaotao

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+6, 鼓励新虫发帖交流，欢迎道生物医药区 2013-04-07 20:16:39
我克隆的是葡萄的基因，但是在ncbi和genoscope上公布的这个基因序列不一样，应该怎么办啊
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2楼2013-04-07 16:40:15
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 21:19:35
请使用RACE法，可以克隆得到全长cDNA.
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生而不息，奋斗不止！
3楼2013-04-07 17:12:49
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小小树虫

银虫 (小有名气)
使用扩DNA时的引物不行   一般做RACE
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4楼2013-04-07 17:29:50
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小树虫 at 2013-04-07 17:29:50
使用扩DNA时的引物不行   一般做RACE

为什么不行呢？我的DNA序列是全长也不行么
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5楼2013-04-07 17:31:25
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guaiyaya: 金币+5, ★有帮助 2013-04-08 10:44:16
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 21:19:46
因为RACE的引物，有一个是通用引物，一个是基因特异性引物，首先你的保证GSP可以和试剂盒提供的通用引物配对才能扩增。DNA的引物可以拿来扩增cdna,但要看你的目的是什么了，如果是全长的话，一般是得不到的。
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加油。
6楼2013-04-07 21:55:53
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thinkdoll

金虫 (小有名气)
能的，lz绝知此事要躬行啊！先干再说，也不麻烦。
记得回来向大家汇报心得啊！
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7楼2013-04-08 15:50:07
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by thinkdoll at 2013-04-08 15:50:07
能的，lz绝知此事要躬行啊！先干再说，也不麻烦。
记得回来向大家汇报心得啊！

刚试着扩了一下，DNA长度为2300多bp，可是扩出来上游缺了不到100bp的片段，不知道是不是内含子，2000多的片段不可能就只有一个内含子吧？
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8楼2013-04-08 16:44:43
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lyl_622

新虫 (初入文坛)
在甜橙基因库中搜索了一个已知基因的完整序列，我要用椪柑的cDNA为模板来跑PCR，之后跑电泳，回收测得椪柑中这个基因的完整序列。这个基因3750bp，采用了首尾各取18bp来设计上下游引物，重复10次后都是二聚体，没有出现目的条带。请问如何设计引物来获得cDNA全长，谢谢各位了（新手请多包涵）。
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9楼2014-03-21 16:55:06
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