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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何得到CDNA全长

我用同源克隆的方法得到了一个基因的DNA全长序列,可不可以用扩DNA时的引物来扩增CDNA呢?
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labixiaotao

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+6, 鼓励新虫发帖交流,欢迎道生物医药区 2013-04-07 20:16:39
我克隆的是葡萄的基因,但是在ncbi和genoscope上公布的这个基因序列不一样,应该怎么办啊
2楼2013-04-07 16:40:15
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 21:19:35
请使用RACE法,可以克隆得到全长cDNA.
生而不息,奋斗不止!
3楼2013-04-07 17:12:49
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小小树虫

银虫 (小有名气)

使用扩DNA时的引物不行   一般做RACE
4楼2013-04-07 17:29:50
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小树虫 at 2013-04-07 17:29:50
使用扩DNA时的引物不行   一般做RACE

为什么不行呢?我的DNA序列是全长也不行么
5楼2013-04-07 17:31:25
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
guaiyaya: 金币+5, 有帮助 2013-04-08 10:44:16
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 21:19:46
因为RACE的引物,有一个是通用引物,一个是基因特异性引物,首先你的保证GSP可以和试剂盒提供的通用引物配对才能扩增。DNA的引物可以拿来扩增cdna,但要看你的目的是什么了,如果是全长的话,一般是得不到的。
加油。
6楼2013-04-07 21:55:53
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thinkdoll

金虫 (小有名气)

能的,lz绝知此事要躬行啊!先干再说,也不麻烦。
记得回来向大家汇报心得啊!
7楼2013-04-08 15:50:07
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by thinkdoll at 2013-04-08 15:50:07
能的,lz绝知此事要躬行啊!先干再说,也不麻烦。
记得回来向大家汇报心得啊!

刚试着扩了一下,DNA长度为2300多bp,可是扩出来上游缺了不到100bp的片段,不知道是不是内含子,2000多的片段不可能就只有一个内含子吧?
8楼2013-04-08 16:44:43
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lyl_622

新虫 (初入文坛)

在甜橙基因库中搜索了一个已知基因的完整序列,我要用椪柑的cDNA为模板来跑PCR,之后跑电泳,回收测得椪柑中这个基因的完整序列。这个基因3750bp,采用了首尾各取18bp来设计上下游引物,重复10次后都是二聚体,没有出现目的条带。请问如何设计引物来获得cDNA全长,谢谢各位了(新手请多包涵)。
9楼2014-03-21 16:55:06
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