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非变性电泳，跑出来的胶怎么是这个情况？
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总共点了三个样，怎么是三条蓝色的条带啊，哪里出了问题，有遇到这样情况的吗？ 2013-04-05 09.44.56.jpg |
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-06 12:13:57
myprayer: 回帖置顶 2013-04-06 12:16:48
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样品是纯化的蛋白吗?你这不是三条band,是smear. 一般跑native gel首先要做的是看protein的pI, 然后决定用什么样的胶(酸碱性,浓度).而且SDS-page时的mobility没有任何参考价值,跑多长时间要靠自己找条件. 最后,由于是native状态,如果protein有不同的conformations, 一个蛋白跑出multi band也很正常.这些band中,可能有的是正确的conformation,有些是不正确的,只是转录过程中(常见于细菌表达蛋白)出现的 非最低能级构象.还有,如果使细菌表达蛋白,有些因为和heatshock又结合,也会跑的慢.如果是生物体内提取的蛋白,那结合蛋白就更多了 |
2楼2013-04-06 03:10:20