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植物微量DNA提取
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之前一直做毛状根DNA提取，提不出来，后来知道有微量DNA提取方法，现在想试着提一下~ 看很多文献的DNA提取缓冲液(100 mmol/L pH 8.0的Tris HCl，20 mmol/L pH 8.0的EDTA，500 mmol/L NaCl，10 ％SDS）都不同，这是我看文献上面说的，大家都用什么样的DNA提取缓冲液呢？ 实验步骤现在初步设计如下，请大家帮看下是不是可行呢？ 1. 取600 μl DNA提取液于1.5 ml EP管中，65 ℃预热25 min 2. 称取20 mg样品于液氮中研磨至灰白状粉末，放入装有DNA提取液的1.5 ml EP管，65℃恒温水浴15 min，其间摇匀2次 3. 加入等体积的Tris饱和酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，混匀约l0 s后， 60 ℃水浴10 min，12000 rpm离心10 min 4. 取上清液分装于新的EP管，每管装上清液约300 μl，加入300 μl异丙醇，混匀，见絮状物，-20 ℃沉淀15 min。 5. 取出EP管，12000 rpm离心10 min，弃上清液 6. 用75 ％乙醇洗涤DNA沉淀2次，每次静置5 min（除去乙醇），加50 μl水溶解沉淀，于-20 ℃贮存备用。 |
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2楼2013-03-28 16:19:23