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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 核酸浓度测定问题
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lrrnd

木虫 (正式写手)

[求助] 核酸浓度测定问题 已有1人参与

求助各位虫友，我做核酸浓度测定，将10ng/μL的寡核苷酸（约40bp的双链）稀释10倍（2μL原液加到18μL超纯水中）和100倍（2μL原液加到198μL超纯水中），测定浓度时发现稀释10倍的和100倍的溶液的浓度和原液浓度差不多，有时甚至更高，这是何故？
谢谢！

[ 来自科研家族 SJTU校友会 ]
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1楼 2013-03-24 21:16:59
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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lrrnd: 金币+1 2013-03-25 10:03:10
你用的是紫外吸收测的吗？核酸吸光值OD在一定范围内才比较准确，10ng/μl已经是很稀的样品了，再稀释吸光值太小，灵敏度太差。
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6楼2013-03-25 05:45:09
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你用什么仪器测的了，有的仪器到一定程度就测的不准了！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
7楼2013-03-25 08:57:37
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lrrnd: 金币+2 2013-03-25 20:19:28
如果想定量，这种浓度数量级，可以用Invitrogen的Qubit，配合High-sensitivity kit；如果是想跑个胶，通过看胶估计浓度和片段大小，可以用Lonza的FlashGel
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16楼2013-03-25 14:39:00
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普通回帖

lrrnd

木虫 (正式写手)
希望大家提供宝贵意见呀
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2楼2013-03-24 21:23:57
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10ng/μL已经很底了,为什么还要稀释??
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3楼2013-03-24 21:28:05
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lrrnd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-24 21:28:05
10ng/μL已经很底了,为什么还要稀释??

因为实验需要，所以要稀释成1ng/μL，甚至0.5ng/μL
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4楼2013-03-24 21:41:40
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匿名

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5楼2013-03-24 22:51:41
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lrrnd: 金币+2 2013-03-25 10:02:53
请问你是用什么测定的浓度。
1 ng 甚至pg级别了，一般的仪器（比如Nanodrop）是不可以的～
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8楼2013-03-25 09:23:52
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lrrnd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:45:09
你用的是紫外吸收测的吗？核酸吸光值OD在一定范围内才比较准确，10ng/μl已经是很稀的样品了，再稀释吸光值太小，灵敏度太差。

用的是eppendorf的分光光度计，这很不准，还用nanodrop也测过，但是结果很不理想
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9楼2013-03-25 10:01:17
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lrrnd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by heroyl at 2013-03-25 08:57:37
看你用什么仪器测的了，有的仪器到一定程度就测的不准了！

用的是eppendorf的分光光度计，这很不准，还用nanodrop也测过，但是结果很不理想
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10楼2013-03-25 10:01:40
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