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lrrnd

木虫 (正式写手)

[求助] 核酸浓度测定问题已有1人参与

求助各位虫友,我做核酸浓度测定,将10ng/μL的寡核苷酸(约40bp的双链)稀释10倍(2μL原液加到18μL超纯水中)和100倍(2μL原液加到198μL超纯水中),测定浓度时发现稀释10倍的和100倍的溶液的浓度和原液浓度差不多,有时甚至更高,这是何故?
谢谢!

[ 来自科研家族 SJTU校友会 ]
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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感谢参与,应助指数 +1
lrrnd: 金币+1 2013-03-25 10:03:10
你用的是紫外吸收测的吗?核酸吸光值OD在一定范围内才比较准确,10ng/μl已经是很稀的样品了,再稀释吸光值太小,灵敏度太差。
6楼2013-03-25 05:45:09
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你用什么仪器测的了,有的仪器到一定程度就测的不准了!
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
7楼2013-03-25 08:57:37
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lrrnd: 金币+2 2013-03-25 20:19:28
如果想定量,这种浓度数量级,可以用Invitrogen的Qubit,配合High-sensitivity kit;如果是想跑个胶,通过看胶估计浓度和片段大小,可以用Lonza的FlashGel
16楼2013-03-25 14:39:00
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普通回帖

lrrnd

木虫 (正式写手)

希望大家提供宝贵意见呀
2楼2013-03-24 21:23:57
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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10ng/μL已经很底了,为什么还要稀释??
3楼2013-03-24 21:28:05
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lrrnd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-24 21:28:05
10ng/μL已经很底了,为什么还要稀释??

因为实验需要,所以要稀释成1ng/μL,甚至0.5ng/μL
4楼2013-03-24 21:41:40
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匿名

用户注销 (小有名气)

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本帖仅楼主可见
5楼2013-03-24 22:51:41
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lrrnd: 金币+2 2013-03-25 10:02:53
请问你是用什么测定的浓度。
1 ng 甚至pg级别了,一般的仪器(比如Nanodrop)是不可以的~
8楼2013-03-25 09:23:52
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lrrnd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:45:09
你用的是紫外吸收测的吗?核酸吸光值OD在一定范围内才比较准确,10ng/μl已经是很稀的样品了,再稀释吸光值太小,灵敏度太差。

用的是eppendorf的分光光度计,这很不准,还用nanodrop也测过,但是结果很不理想
9楼2013-03-25 10:01:17
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lrrnd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by heroyl at 2013-03-25 08:57:37
看你用什么仪器测的了,有的仪器到一定程度就测的不准了!

用的是eppendorf的分光光度计,这很不准,还用nanodrop也测过,但是结果很不理想
10楼2013-03-25 10:01:40
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