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A06060054

木虫 (正式写手)

[交流] 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？

本人想检测体外培养淋巴细胞内CRHR2 mRNA的表达，设计了十多对引物，合成后进行实时定量PCR检测，但是都没有得到Ct值，说明没把基因扩增出来。这样是不是能说明这种基因在体外培养的淋巴细胞内无mRNA的表达？本人设计的引物都经过严格的验证，虽然引物有可能无效，但不应该都不好使呀。检测某种基因受否表达的要求和方法有没有标准啊？我这样下结论对吗？论文里可不可以这么写？

[ Last edited by A06060054 on 2013-3-22 at 11:19 ]
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1楼 2013-03-22 11:18:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-24 09:45:09
A06060054: 金币+5, 谢谢哦 2013-03-24 18:25:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by A06060054 at 2013-03-23 09:08:08
正对照是什么？是阳性对照吗？内参我做出来了啊，每个孔Ct值都是19点多。...

你的引物如果能够P出基因组DNA，对从RNA反转录成cDNA却无法检出，而样品可以正常扩增出内参，至少可以说明目的基因表达水平很低。此外，你可以试试增加cDNA用量来P，看是否能P出来。
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8楼2013-03-23 09:16:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做正对照了吗？比方说内参是不是可以P出来？
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2楼2013-03-22 12:35:28
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的RNA质量如何，反转率效率呢，我觉得最好用这些引物先做个普通的RT-PCR检测一下上面的问题，当然，跟楼上所说，做个内标基因做参照，这样才能更好的说明问题
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3楼2013-03-22 16:19:38
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设计引物参考的序列跟生物体实际的序列是否一致？也就是说，失败那么多，有没有用基因组DNA进行PCR扩增测序证明有这个基因？内参做出来了吗？
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4楼2013-03-22 17:49:48
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