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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
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A06060054

木虫 (正式写手)

[交流] 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？

本人想检测体外培养淋巴细胞内CRHR2 mRNA的表达，设计了十多对引物，合成后进行实时定量PCR检测，但是都没有得到Ct值，说明没把基因扩增出来。这样是不是能说明这种基因在体外培养的淋巴细胞内无mRNA的表达？本人设计的引物都经过严格的验证，虽然引物有可能无效，但不应该都不好使呀。检测某种基因受否表达的要求和方法有没有标准啊？我这样下结论对吗？论文里可不可以这么写？

[ Last edited by A06060054 on 2013-3-22 at 11:19 ]
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1楼 2013-03-22 11:18:25
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A06060054

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:35:28
做正对照了吗？比方说内参是不是可以P出来？

正对照是什么？是阳性对照吗？内参我做出来了啊，每个孔Ct值都是19点多。
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5楼2013-03-23 09:08:08
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A06060054

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2013-03-22 16:19:38
你的RNA质量如何，反转率效率呢，我觉得最好用这些引物先做个普通的RT-PCR检测一下上面的问题，当然，跟楼上所说，做个内标基因做参照，这样才能更好的说明问题

内参做出来了，Ct值比较理想，确定模板没有问题啊。就是目的基因没有结果，也没做普通PCR啊！有必要吗？普通PCR验证引物好使做实时一定好使吗？
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6楼2013-03-23 09:11:21
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A06060054

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 547star at 2013-03-22 17:49:48
设计引物参考的序列跟生物体实际的序列是否一致？也就是说，失败那么多，有没有用基因组DNA进行PCR扩增测序证明有这个基因？内参做出来了吗？

设计引物时基因序列是从NCBI上得到，动物种属也一致，基因组DNA应该是有这个基因吧！就是不知道在脾脏细胞内是否表达？所以这么做的。结果目的基因没做出来，内参做出来了，内参Ct值也比较理想啊。
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7楼2013-03-23 09:14:16
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