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A06060054

木虫 (正式写手)


[交流] 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果,是否能说明目的基因不表达?

本人想检测体外培养淋巴细胞内CRHR2 mRNA的表达,设计了十多对引物,合成后进行实时定量PCR检测,但是都没有得到Ct值,说明没把基因扩增出来。这样是不是能说明这种基因在体外培养的淋巴细胞内无mRNA的表达?本人设计的引物都经过严格的验证,虽然引物有可能无效,但不应该都不好使呀。检测某种基因受否表达的要求和方法有没有标准啊?我这样下结论对吗?论文里可不可以这么写?

[ Last edited by A06060054 on 2013-3-22 at 11:19 ]
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木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
设计引物参考的序列跟生物体实际的序列是否一致?也就是说,失败那么多,有没有用基因组DNA进行PCR扩增测序证明有这个基因?内参做出来了吗?
4楼2013-03-22 17:49:48
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查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做正对照了吗?比方说内参是不是可以P出来?
2楼2013-03-22 12:35:28
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的RNA质量如何,反转率效率呢,我觉得最好用这些引物先做个普通的RT-PCR检测一下上面的问题,当然,跟楼上所说,做个内标基因做参照,这样才能更好的说明问题
3楼2013-03-22 16:19:38
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A06060054

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:35:28
做正对照了吗?比方说内参是不是可以P出来?

正对照是什么?是阳性对照吗?内参我做出来了啊,每个孔Ct值都是19点多。
5楼2013-03-23 09:08:08
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