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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
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A06060054

木虫 (正式写手)

[交流] 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？

本人想检测体外培养淋巴细胞内CRHR2 mRNA的表达，设计了十多对引物，合成后进行实时定量PCR检测，但是都没有得到Ct值，说明没把基因扩增出来。这样是不是能说明这种基因在体外培养的淋巴细胞内无mRNA的表达？本人设计的引物都经过严格的验证，虽然引物有可能无效，但不应该都不好使呀。检测某种基因受否表达的要求和方法有没有标准啊？我这样下结论对吗？论文里可不可以这么写？

[ Last edited by A06060054 on 2013-3-22 at 11:19 ]
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1楼 2013-03-22 11:18:25
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gmrice

金虫 (正式写手)
★
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我们做植物的一般可以做个野生型的对照，这样的话反转录的质量就不 用考虑了，因为野生型还扩不出来那肯定是反转录没做好，不知道你这个是不是可以做个对照，楼上说的阳性对照就是这个意思，让你找一个确定表达该基因的样品做对照，其实引物不是很大问题，一般软件设计的都可以扩出来。
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11楼2013-03-25 18:47:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做正对照了吗？比方说内参是不是可以P出来？
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2楼2013-03-22 12:35:28
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的RNA质量如何，反转率效率呢，我觉得最好用这些引物先做个普通的RT-PCR检测一下上面的问题，当然，跟楼上所说，做个内标基因做参照，这样才能更好的说明问题
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3楼2013-03-22 16:19:38
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设计引物参考的序列跟生物体实际的序列是否一致？也就是说，失败那么多，有没有用基因组DNA进行PCR扩增测序证明有这个基因？内参做出来了吗？
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4楼2013-03-22 17:49:48
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