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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » sanger测序原理和PCR关系
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qwky2010

金虫 (著名写手)

[交流] sanger测序原理和PCR关系 已有1人参与

有个问题请教下大家，sanger双脱氧法测定单链DNA序列，可以说是PCR的过程吗，感觉和PCR方法很接近呀，

未命名.jpg
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天道酬勤
1楼 2013-03-16 10:47:00
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gyesang

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by qwky2010 at 2013-03-16 22:16:12
谢谢，我还想表达一个意思，穆利斯83年才提出PCR啊，...

的确但是没有PCR，也没有PCR这个概念，也没有热循环。当时的这个反应应该叫酶反应，同时，你可能也注意到了当时的测序是用4个管子同时反应，然后跑胶分析。现在测序反应在一个管子反应，将四种ddNTP用不同荧光基因进行标记，然后跑一个泳道分析即可
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-03-16 23:39:06
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-16 18:49:01
amisking: 回帖置顶 2013-03-16 18:49:04
sanger双脱氧法测定单链DNA序列就是基于PCR，对PCR反应完成时产物的长度进行的末端分析，得出模板链的碱基序列

而新一代的454测序或者叫焦磷酸测序是基于PCR反应合成时的测序，通过dNTP碱基掺入时，DNA聚合酶催化聚合dNMP同时释放PPi，再通过分解产生PPi偶联的化学发光

[ Last edited by gyesang on 2013-3-16 at 23:20 ]
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-03-16 15:54:09
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qwky2010

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-16 15:54:09
sanger双脱氧法测定单链DNA序列就是基于PCR，对PCR反应完成时产物的长度进行的末端分析，得出模板链的碱基序列

而新一代的454测序或者叫焦磷酸测序是基于PCR反应合成时的测序

谢谢，我还想表达一个意思，穆利斯83年才提出PCR啊，
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天道酬勤
3楼2013-03-16 22:16:12
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